[发明专利]一种快速区分乳酸菌菌种的方法在审
| 申请号： | 201610044832.2 | 申请日： | 2016-01-22 |
| 公开（公告）号： | CN105567787A | 公开（公告）日： | 2016-05-11 |
| 发明（设计）人： | 黄艳娜;李楠;游春苹;刘振民 | 申请（专利权）人： | 光明乳业股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/52 | 分类号： | C12Q1/52;C12Q1/32;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 上海弼兴律师事务所 31283 | 代理人： | 朱水平;沈利 |
| 地址： | 201103 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： |
本发明提供了一种快速区分乳酸菌菌种的方法。该方法包括：(1)将待检乳酸菌菌种的培养液离心，取上清稀释20-25倍；(2)按表1将上清、水、双甘氨肽缓冲液、NAD+与D-GPT在加入D或L-乳酸脱氢酶前混合2-4min，读取吸光值A1，然后加入D-或L-LDH反应4-6min，读取吸光值A2；(3)将样品的吸光值变化值(A2-A1)减去对照的吸光值变化值(A2-A1)得ΔAD-乳酸或ΔAL-乳酸，代入以下公式，计算得待检乳酸菌菌种的D-乳酸或L-乳酸浓度： |
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| 搜索关键词： | 一种 快速 区分 乳酸菌 菌种 方法 | ||
【主权项】：
一种快速区分乳酸菌菌种的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)将待检乳酸菌菌种的培养液离心，取上清稀释20‑25倍，得稀释培养液上清；(2)用D‑乳酸脱氢酶和L‑乳酸脱氢酶按如下表1所示体系分别与步骤(1)所述稀释培养液上清进行反应：表1 乳酸测定的反应体系![]()
其中，所述稀释培养液上清、水、双甘氨肽缓冲液、NAD+与D‑谷氨酸‑丙酮酸转氨酶在加入D或L‑乳酸脱氢酶前混合，混合时间为2‑4min，然后读取吸光值A1，然后加入D‑乳酸脱氢酶或L‑乳酸脱氢酶反应，反应时间为4‑6min，然后读取溶液吸光值A2；(3)分别计算步骤(2)中所述对照和所述样品的吸光值变化值A2‑A1，将所述样品的吸光值变化值减去所述对照的吸光值变化值得ΔAD‑乳酸或ΔAL‑乳酸；将所得ΔAD‑乳酸或ΔAL‑乳酸代入以下公式，计算得到步骤(1)所述待检乳酸菌菌种的D‑乳酸或L‑乳酸浓度：![]()
其中，V为终体积，单位为mL；MW为乳酸的分子量，单位为g/mol；ε为340nm NADP的消光系数；d为光路，单位为cm；v为样品体积，单位为mL；根据得到的所述待检乳酸菌菌种的D‑乳酸和L‑乳酸的浓度的比值对所述待检乳酸菌菌种进行区分。
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