[发明专利]一种铁皮石斛组培接种方法

摘要

本发明公开的铁皮石斛组培接种方法，包括以下步骤：铁皮石斛果荚的选择、种胚播种、无菌种胚混合液的制备、萌发生根培养基的配制、种胚的接种与培养；本发明方法是一种简单、高效的组培接种方法，该方法经过一次诱导萌发生根培养基接种于培养种胚，不需要进行反复的转接，并且本发明方法配制的萌发生根培养基以天然抑菌添加物为主，无有害化学成分添加，从而能够有效解决传统人工逐颗接种调试时间长、工作量大、污染率高、生产出的种苗稳定性差的问题，本发明方法可大幅降低铁皮石斛组培过程中的污染率，降低铁皮石斛的组培成本；本发明方法使铁皮石斛组培接种效率和移栽成活率大幅提高，生产效率是传统方法的3-4倍，移栽成活率可达92-93%以上。

主权项

一种铁皮石斛组培接种方法，其特征在于包括以下步骤：1）铁皮石斛果荚的选择：选择露天仿野生栽培3‑6年生的铁皮石斛所结并生长110‑130天所形成的成熟未开裂果荚；2）种胚播种：将铁皮石斛果荚在超净工作台上经质量百分比浓度为65‑75 %的酒精消毒12‑15 min后，再将果荚内的种胚播种到无菌烧杯中；3）无菌种胚混合液的制备：在步骤2）的无菌烧杯中加入无菌水并搅拌，将种胚分散在无菌水中，分散度为60‑100个/mL，得到无菌种胚混合液；4）萌发生根培养基的配制：以1/2 MS培养基作为基础培养基，以该基础培养基的体积计，向该基础培养基中添加下列添加物：萘乙酸0.7‑0.9 mg/L、活性炭0.2‑0.5 g/L、6‑苄氨基腺嘌呤0.05‑0.2 mg/L、椰汁50‑80 g/L、去皮香蕉30‑50 g/L、大米20‑30 g/L、蔗糖25‑35 g/L和琼脂5.8‑6.3 g/L，得到萌发生根培养基，并将该萌发生根培养基的pH值调至6.0~6.2，之后将配制的萌发生根培养基分装到带透气孔的650 mL组培瓶中，每个组培瓶的灌液深度为3‑4 cm，然后将各个组培瓶在高压灭菌锅内于121 ℃灭菌20‑23 min，冷却后备用；5）种胚的接种与培养：将无菌种胚混合液用无菌移液器接种到萌发生根培养基中，每个组培瓶的接种量为800‑1000 μL，再用无菌涂布棒涂平，将组培瓶的瓶盖旋紧，接种完成；之后将各个组培瓶于22‑24 ℃下暗处理5‑7天，然后在每日光照强度为1200‑1500 Lux、光照时间为10‑11 h的培养环境下培养30‑40天，最后在每日光照强度为2500‑3000 Lux、光照时间为12‑13 h的培养环境下培养若干天，直至种胚萌发并得到铁皮石斛组培苗。