[发明专利]一种从微量辣椒疫霉菌游动孢子中提取RNA的方法

摘要

本发明涉及一种从微量辣椒疫霉菌游动孢子中提取RNA的方法，属于分子生物学领域。从微量辣椒疫霉菌游动孢子中提取RNA的具体步骤如下：首先含有RNase抑制剂的DEPC水裂解辣椒疫霉孢子囊，4℃，18000g离心5min收集5000个游动孢子；加入1mL Trizol、1μLβ巯基乙醇，1μL RNase抑制剂，剧烈斡旋1min后超声波处理5min；加入200μL氯仿剧烈斡旋，室温静置15min，4℃，12000g离心15min，取上层水相；加入500μL异丙醇，上下反转5‑10次，加2μL糖原和1μLRNase抑制剂，于‑20℃过夜放置12h；剧烈斡旋于4℃，12000g离心15min后弃上清，用1mL 75％乙醇洗涤2次；沉淀室温干燥10min后，用10μL DEPC水溶解。本发明的有益效果在于：减少了RNA降解，有效富集了RNA，为从微量辣椒疫霉游动孢子中取RNA提供了一种有效方法。

主权项

一种从微量辣椒疫霉菌游动孢子中提取RNA的方法，其特征该方法的具体步骤如下：a.均匀加3mL预冷且含RNase抑制剂、1μL/mL的DEPC水于产孢的辣椒疫霉培养皿中，置于4℃冰箱放置10min，使游动游动孢子释放于水中，形成游动孢子悬浮液；将含5000个游动孢子的悬浮液转入15mL离心管中，于4℃，18000g离心5min，弃上清；b.加入1mL Trizol、1μL β‑巯基乙醇、1μL RNase抑制剂，剧烈斡旋1min，转入1mL EP管中，于20℃超声波处理5min；c.离心：加入200μL氯仿，剧烈斡旋1min，置于室温15min，于4℃，12000g离心15min；d.将上层水相转入新的1.5mL EP管中，加入500μL异丙醇，于手中上下翻转5‑10次，再加入2μL的糖原，1μL RNase抑制剂，置于‑20℃，过夜放置12h；e.于4℃，12000g直接离心15min；管底形成沉淀；f.弃上清，加入1mL 75％乙醇，剧烈斡旋30s，2次；g.于室温晾干10分钟；h.加入10μL DEPC水溶解。