[发明专利]从杨梅果肉中分离纯化四种黄酮糖苷的方法

摘要

本发明提供一种从杨梅果肉中分离纯化四种黄酮糖苷的方法，四种黄酮糖苷为矢车菊素‑3‑O‑葡萄糖苷、杨梅苷、金丝桃苷、槲皮苷，通过样品提取、固相萃取柱和半制备高效液相色谱分离三个步骤完成。本发明以杨梅果肉冷冻干燥粉末为原料，经溶剂提取、C18固相萃取柱、半制备高效液相分离纯化得到高纯度的黄酮糖苷类化合物。本发明方法操作简单，耗能较少。生产周期短，设备投入少，整个纯化过程条件稳定容易控制。提取过程中使用的固相萃取柱和有机试剂可反复利用，节省成本。

主权项

1.一种从杨梅果肉中分离纯化四种黄酮糖苷的方法，四种黄酮糖苷为矢车菊素‑3‑O‑葡萄糖苷、杨梅苷、金丝桃苷、槲皮苷，其特征在于，通过以下步骤实现：（1）将杨梅果肉液氮处理后使用冷冻干燥机除去果肉水分，将冷冻干燥后的杨梅果肉用磨样机打磨成粉末状；（2）取冷冻干燥的杨梅果肉粉末，用含0.5%甲酸的80%甲醇溶液超声提取2次，固液比为1:20，每次30 min，经真空抽滤后，合并上清液，在旋转蒸发仪上蒸干至无甲醇相，溶于含0.5%甲酸的去离子水中；（3）将步骤（2）得到的水溶液上样C18 Sep‑Pak®固相萃取柱，上样后固相萃取柱先用含0.5%甲酸的水洗脱4个柱床体积以去掉一些极性较高的杂质，然后依次用甲醇进行梯度洗脱，洗脱液在旋转蒸发仪上37℃蒸干分别得到富含花青苷的10%洗脱组分和富含黄酮醇的50%洗脱组分；所述的固相萃取柱型号为Waters C18 Sep‑Pak® Cartridges 12 cc/2 g；所述的梯度洗脱液分别为含0.5%甲酸的10%甲醇溶液、50%甲醇溶液，洗脱顺序为含0.5%甲酸的10%甲醇溶液10个柱床体积、50%甲醇溶液4个柱床体积；（4）将10%洗脱组分用含0.1%盐酸的甲醇溶液配制成100 mg/mL的浓度，进样量为300 μL，流速为5mg/mL，收集保留时间为39.1 min的组分，在旋转蒸发仪上37℃蒸干得到一种花青苷单体粉末，为矢车菊素‑3‑O‑葡萄糖苷，将50%洗脱组分用甲醇溶液配制成100 mg/mL的浓度，进样量为200 μL，流速为5mg/mL，分别收集保留时间为62.6、63.8、75.6 min的组分，在旋转蒸发仪上37℃蒸干分别得到三种黄酮醇单体粉末，分别为杨梅苷、金丝桃苷、槲皮苷；四种黄酮糖苷的结构式如下：。