[发明专利]一种等离子体正向诱变耐铅乳酸菌的筛选及其分析方法

摘要

本发明公开了一种等离子体正向诱变耐铅乳酸菌的筛选及其分析方法，包括以下步骤：S1，细菌培养：将甘油管中菌种划线接种到MRS固体培养基上，在36‑38℃培养47‑49h后，将菌种转接于MRS液体培养基，在36‑38℃下180r/min震荡需氧培养23‑25h，在对数末期获得菌体；S2，诱变：在无菌条件下分别取培养后的菌液1.5mL于18个一次性小平板中，分别作标签1min，3min，5min，7min，9min，每个时间做3个平行，同时做3个空白对照，无菌条件下，置于等离子体发生室诱变，诱变完成后，将相同时间的3个平行混合，每个时间取100μL用于菌落计数，0.5mL用于菌种保存，取剩余1ml菌液进行铅吸附试验。本发明步骤清晰，操作简单，可以准确实现等离子体正向诱变耐铅乳酸菌的筛选及其分析，适合推广。

主权项

一种等离子体正向诱变耐铅乳酸菌的筛选及其分析方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，细菌培养：将甘油管中菌种划线接种到MRS固体培养基上，在36‑38℃培养47‑49h后，将菌种转接于MRS液体培养基，在36‑38℃下180r/min震荡需氧培养23‑25h，在对数末期获得菌体；S2，诱变：在无菌条件下分别取培养后的菌液1.5mL于18个一次性小平板中，分别作标签1min，3min，5min，7min，9min，每个时间做3个平行，同时做3个空白对照，无菌条件下，置于等离子体发生室诱变，诱变完成后，将相同时间的3个平行混合，每个时间取100μL用于菌落计数，0.5mL用于菌种保存，取剩余1ml菌液进行铅吸附试验；S3，一次筛选：采用48孔板高通量筛选方法，用牙签挑取诱变的单菌落于装有1.0mL培养液的48孔深孔板中，并接种出发菌株JT1‑YB作为对照，并置于36‑38℃的摇床培养23‑25h，待培养完成后，通过与JT1‑YB比较48孔深孔板中变浑浊的初步判断为疑似突变体菌株；S4，二次筛选：将疑似突变体菌株分别均匀涂布于含有600mg/mL、800mg/mL、1000mg/mL乙酸铅的MRS琼脂平板，同时接种出发菌株JT1‑YB，培养23‑25h后，挑去生长菌落做铅吸附试验并保存菌种；S5，生长状况分析：把菌株按1％接种量接种于pH值2.5、3.6、4.2、5.8、6.6、7.2、8.8的液体培养基中，37℃培养24h测定OD600nm，以pH为横坐标，OD值为纵坐标，绘制曲线图进行分析图进行分析；S6，耐受胆盐分析：取0.1ml菌液接在含0％，0.2％，0.4％，0.6％，0.8％胆盐的液体培养基中，36‑38℃培养23‑25h，稀释后，对适当浓度进行涂布，记录生长情况；S7，耐受消化酶分析：取菌液接种于含1％胃蛋白酶的液体培养基中，以不添加蛋白酶的液体培养基作对照，在36‑38℃条件下培养0h、8h并且取样一次，对适当倍数的进行平板计数，计算存活率。