[发明专利]用人骨髓间充质干细胞预测遗传毒性的方法

摘要

本发明提供了一种利用人骨髓间充质干细胞预测化学品和环境样品潜在遗传毒性的快速的、具有早期预测性的、基于生物标记物的筛选方法，通过本发明提供的ATM、ATR、p53、p21、H2AX、Gadd45a、Bax基因标志物中的一种或多种预测受试物的遗传毒性。通过化学品或环境样品与hBMSCs进行接触暴露，通过实时定量聚合酶链式反应法作为检测基础，定量检测所述基因标志物的表达量的变化程度，来判断受试物潜在遗传毒性。本发明成功解决遗传毒性评价中动物实验和体外实验存在的实验周期长、遗传毒性检测终点滞后、实验结果外推到人体存在种属差异等问题，为化学品和环境样品遗传毒性检测提供了一种高效、灵敏、准确的评价方法。

主权项

一种用人骨髓间充质干细胞预测遗传毒性的方法，其特征在于，步骤如下：(1)人骨髓间充质干细胞体外培养与增殖，培养至人骨髓间充质干细胞铺满培养瓶底部50％以上，冲洗培养基，加入胰蛋白酶进行消化，收获人骨髓间充质干细胞；(2)人骨髓间充质干细胞接种与体外暴露：调节步骤(1)获得人骨髓间充质干细胞密度至0.1×10⁶‑1×10⁶个/mL，接种于孔板中，培养24h，待人骨髓间充质干细胞适应培养环境，对其进行体外化学品暴露处理；(3)人骨髓间充质干细胞RNA提取，收获经步骤(2)处理的细胞，提取总RNA；(4)采用实时定量PCR进行所述生物标志基因的mRNA表达的检测。