[发明专利]快速选育猪瘟兔化弱毒株(C株)ST敏感细胞系的方法及专用引物有效
| 申请号： | 201610053986.8 | 申请日： | 2016-01-26 |
| 公开（公告）号： | CN105886662B | 公开（公告）日： | 2020-03-24 |
| 发明（设计）人： | 商晓桂;张贵刚;郝鹏;魏学峰;刘国英;范秀丽;韩志玲;宋志刚;孔彩萍;王艳杰 | 申请（专利权）人： | 金宇保灵生物药品有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京尚诚知识产权代理有限公司 11322 | 代理人： | 鲁兵 |
| 地址： | 010030 内蒙古*** | 国省代码： | 内蒙古;15 |
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| 摘要： |
本发明公开了一种用逆转录PCR(RT‑PCR)技术和实时荧光定量RT‑PCR技术快速选育猪瘟兔化弱毒株(C株)ST(猪睾丸)敏感细胞系的方法。包括1)获得ST单克隆细胞；2)接种猪瘟兔化弱毒株(C株)；3)提取连续收获的各批次猪瘟兔化弱毒液(病毒液)的RNA，用RT‑PCR技术确定ST单克隆细胞系能够持续感染猪瘟兔化弱毒(C株)；4)用实时荧光定量RT‑PCR技术确定拷贝数在10 |
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| 搜索关键词： | 快速 选育 猪瘟 兔化弱毒株 st 敏感 细胞系 方法 专用 引物 | ||
【主权项】：
快速选育猪瘟兔化弱毒株(C株)ST敏感细胞系的方法，主要包括以下步骤：1)获得ST单克隆细胞；2)接种猪瘟兔化弱毒株(C株)；3)提取连续收获的各批次猪瘟兔化弱毒液(病毒液)的RNA，用RT‑PCR技术进行初步鉴定，确定ST单克隆细胞系能够持续感染猪瘟兔化弱毒(C株)；4)用实时荧光定量RT‑PCR技术定量检测猪瘟兔化弱毒液，以确定猪瘟兔化弱毒株(C株)的拷贝数，确定猪瘟兔化弱毒株(C株)能够持续感染细胞，并且在第三批次以及以后批次收获的病毒液的拷贝数能够维持在106拷贝(copies)/mL的确定为猪瘟兔化弱毒株(C株)ST敏感细胞系。
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