[发明专利]构建DNA文库的试剂盒和方法有效
| 申请号： | 201610056639.0 | 申请日： | 2016-01-27 |
| 公开（公告）号： | CN105603535B | 公开（公告）日： | 2018-11-27 |
| 发明（设计）人： | 宗莹;李宗文;刘运超;朱海浩;王大伟;李明洲;宋莉 | 申请（专利权）人： | 北京诺禾致源科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06 |
| 代理公司： | 北京康信知识产权代理有限责任公司 11240 | 代理人： | 赵囡囡;吴贵明 |
| 地址： | 102200 北京市昌平区*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供了构建DNA文库的试剂盒和方法。该试剂盒包括：酶试剂、缓冲液及接头组合，酶试剂包括第一酶混液、T4DNA连接酶及第二酶混液，第一酶混液由T4多聚核酸激酶、T4DNA聚合酶、Klenow片段及rTaq酶混合而成；第二酶混液为2X KAPA HiFi HotStart预混液；缓冲液包括第一缓冲液和第二缓冲液，第一缓冲液由10X T4DNA连接酶缓冲液、dNTP混合液及ATP混合而成；第二缓冲液由ATP、Tris‑HCl、MgCl2、PEG8000、Tween 20及二硫苏糖醇混合而成；接头组合包括接头序列组和标签序列组。该试剂盒能够降低文库构建成本并提高扩增效率。 | ||
| 搜索关键词： | 构建 dna 文库 试剂盒 方法 | ||
【主权项】：
1.一种构建DNA文库的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：酶试剂，所述酶试剂包括第一酶混液、T4 DNA连接酶以及第二酶混液，所述第一酶混液由T4多聚核酸激酶、T4 DNA聚合酶、Klenow片段以及rTaq酶混合而成；所述第二酶混液为2X KAPA HiFi HotStart预混液；缓冲液，所述缓冲液包括所述第一酶混液所对应的第一缓冲液和所述T4 DNA连接酶所对应的第二缓冲液，所述第一缓冲液由10X T4 DNA连接酶缓冲液、dNTP混合液以及ATP混合而成；所述第二缓冲液由ATP、Tris‑HCl、MgCl2、PEG8000、Tween 20以及二硫苏糖醇混合而成；以及接头组合，所述接头组合包括接头序列组和标签序列组；所述第一酶混液中，所述T4多聚核酸激酶的工作浓度为0.05～0.2U/μL，所述T4 DNA聚合酶的工作浓度为0.02～0.04U/μL，所述Klenow片段的工作浓度为0.01～0.03U/μL，所述rTaq酶的工作浓度为0.02～0.04U/μL；所述第一缓冲液中，所述10X T4 DNA连接酶缓冲液的工作浓度为0.8X～2X，所述dNTP混合液的工作浓度0.3～0.6mM；所述ATP的工作浓度为1.5～2.2mM；所述第二缓冲液中，所述ATP的工作浓度为1.5～3mM，所述Tris‑HCl的工作浓度为0.04～0.08M，所述MgCl2的工作浓度为0.01～0.03M，所述PEG8000的工作浓度为5wt％～10wt％，所述Tween 20的工作浓度为1v％～4v％，所述二硫苏糖醇的工作浓度为0.001～0.003M；所述T4 DNA连接酶的工作浓度为200～800U/μL；所述2X KAPA HiFi HotStart预混液的工作浓度为1X。
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