[发明专利]一种利巴韦林的制备方法

摘要

本发明涉及一种利巴韦林的制备方法，以过表达嘌呤核苷磷酸化酶(PNPase)的基因工程菌BL21/pET-His-pupG为生产菌株，采用乳糖诱导培养收集细胞，并利用明胶包埋法对细胞进行固定化处理。在pH7.6的磷酸盐缓冲液中，使用固定化细胞催化底物鸟苷和1,2,4-三氮唑-3-甲酰胺(TCA)连续多批次生产利巴韦林，批次最高转化率可达到83％以上。最后提取转化液中的利巴韦林，产品纯度可达到99％以上，提取过程总收率达75％以上。

主权项

一种利巴韦林的制备方法，其特征在于：具体方法为：(1)以基因工程菌BL21/pET‑His‑pupG为菌种，使用发酵罐培养，获得细胞；(2)使用明胶包埋细胞，制成固定化重组表达PNPase的全细胞作为催化剂，经酶促反应得到利巴韦林转化液；(3)利巴韦林转化液提取a.对利巴韦林转化液8000r/min离心5‑10min，获得上清液，将上清液加热至60‑80℃，使用1‑2％的活性炭脱色20‑40min，过滤得滤清液；b.将滤清液减压蒸发浓缩至1/4‑1/3，在0‑4℃结晶10‑12h，过滤析出的鸟苷，继续浓缩至利巴韦林即将析出为止，加入纯乙醇，至乙醇终浓度90％，利巴韦林浓度35‑45g/L，在85‑95℃加热，充分搅拌溶解利巴韦林，趁热过滤，将上清在0‑4℃结晶1‑2d，过滤制得利巴韦林结晶；c.将利巴韦林晶体重新溶解于90％的乙醇，利巴韦林浓度35‑45g/L，85‑95℃加热溶解过滤，0‑4℃结晶10‑12h，即重结晶，经过两次重结晶后，离心分离、干燥即可得到利巴韦林纯品。