[发明专利]一种基于ELISA检测DNA-蛋白交联体的试剂盒

摘要

本发明公开了一种基于ELISA检测DNA-蛋白交联体的试剂盒，包括了细胞核抽提/裂解/Tris饱和酚回收的DPC提取、DPC中基因组DNA的SYBR Green Ⅰ定量、全能核酸酶消化基因组DNA以增强DPC中抗原在ELISA板上的包被能力等样品处理方法中的各类独立包装的试剂。利用该试剂盒，成功检测出O6-烷基转移酶(MGMT)在氮芥染毒后与DNA的交联体(M-DPC)显著增加，与文献报道一致。该试剂盒快速、简便、灵敏。

主权项

一种基于ELISA检测DNA‑蛋白交联体的试剂盒，包括如下独立包装部分：1)试剂1，所述试剂1组成为20mM Tris‑HCl，10mM MgCl₂，2％v/v Triton‑X100，0.65M sucrose；2)试剂2，所述试剂2的pH 8.0，其组成为75mM NaCl，24mM EDTA，1％SDS,10μg/mLRNase A；3)蛋白酶抑制剂混合物，所述混合物的组成为1mM PMSF，1μg/mL pepstatin，0.5μg/mLleupeptin，1.5μg/mL aprotinin；4)试剂3，所述试剂3为凝胶染色用的SYBR Green Ⅰ；5)试剂A，所述试剂A为100mM MgCl₂；6)试剂B，所述试剂B为125U/μL全能核酸酶,Benzonase；7)检测溶液C，所述检测溶液为特异性MGMT识别一抗；8)检测溶液D，所述检测溶液D为HPR标记山羊抗鼠二抗；9)10×ELISA包被液，所述包被液为0.5mol/L碳酸盐缓冲液，PH9.6；10)10×洗涤液，所述洗涤液为含1％Tween‑20的0.1M PBS；11)封闭液，所述封闭液为含0.5％BSA的0.01M PBS；12)样品稀释液，所述样品稀释液为8mM NaOH；13)检测稀释液，所述检测稀释液为含0.1％Tween‑20及0.5％BSA的0.01M PBS；14)底物溶液TMB；15)终止液2N H₂SO₄；16)小牛胸腺DNA标准干粉品；17)MGMT抗原标准冻干品。