[发明专利]一种毛细管电泳检测凝血酶浓度的方法

摘要

本发明属于生物分析领域，涉及一种毛细管电泳检测凝血酶浓度的方法，步骤如下，(1)设计5’端偶联荧光染料的DNA，形成含有G‐四链体结构的DNA荧光探针；(2)将含G‐四链体结构的DNA荧光探针与凝血酶混合，经荧光毛细管电泳检测，计算峰面积比(S_complex/S_Total)，拟合得到峰面积比—浓度标准曲线，对照标准曲线计算待测样品中凝血酶浓度。采用上述技术方案提供的毛细管电泳检测凝血酶浓度的方法，操作简单，可重复性高，能方便快捷的检测出样品中凝血酶的浓度，进一步拓展了DNA荧光探针在生物分析领域的应用。

主权项

1.一种毛细管电泳检测凝血酶浓度的方法，其特征在于，所述检测步骤如下：(1)选取带有荧光染料的DNA序列FAM‑F29；(2)将步骤(1)所述的FAM‑F29在浓度均为5mM的Na+、K+盐溶液下反应24小时，得到浓度为2μM的含有G‐四链体结构的DNA荧光探针溶液；(3)将粉末状的凝血酶溶解于Tris‑HCl缓冲溶液中，稀释成不同浓度的凝血酶溶液；(4)将步骤(2)所述的G‑四链体结构的DNA荧光探针溶液与等体积的步骤(3)所述的凝血酶溶液在37℃恒温水浴下混合，得到凝血酶与G‑四链体结构的DNA荧光探针复合物；(5)荧光毛细管电泳检测：将步骤(4)所述的复合物用荧光毛细管电泳检测，测定复合物通过检测通道峰面积与总的DNA通过检测通道的峰值面积之比，进行线性拟合，绘制峰面积比—浓度的标准曲线，对照标准曲线确定待测样品中凝血酶浓度。