[发明专利]一种表面修饰的磁性纳米颗粒及其制备方法与应用

摘要

本发明公开了一种表面修饰的磁性纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：步骤1：制备磁性纳米颗粒；步骤2：使用抗体或者适配体对步骤1中得到的磁性纳米颗粒进行表面修饰；步骤3：加入过量的BSA溶液封闭磁性纳米颗粒表面修饰物的多余位点；步骤4：清洗步骤3中得到的经表面修饰的磁性纳米颗粒。本发明还公开了以上述方法制备的表面修饰的磁性纳米颗粒及其在捕获循环肿瘤细胞以及在循环肿瘤细胞的代谢分子分析中的应用，该磁性纳米颗粒既可以作为捕获循环肿瘤细胞的材料，又可以作为质谱分子分析的基质，弥补了目前循环肿瘤细胞研究基于蛋白和基因分析方法的不足。

主权项

1.一种表面修饰的磁性纳米颗粒在循环肿瘤细胞的代谢分子分析中的应用，其特征在于，所述应用包括以下步骤：步骤0：制备所述表面修饰的磁性纳米颗粒步骤0.1：将三氯化铁和柠檬酸三钠溶解在乙二醇溶液中得到混合溶液，向所述混合溶液中加入乙酸钠，在室温下超声半小时，并且反应在聚四氟乙烯衬底的铁氟龙高压反应釜中进行，150～195摄氏度条件下反应10小时以上，得到黑色沉淀物；利用乙醇和去离子水冲洗上述反应物，制得含铁氧化物的磁性纳米颗粒，在60摄氏度下干燥以备使用；步骤0.2：使用抗体对步骤0.1中得到的所述磁性纳米颗粒进行表面修饰，所述抗体能够特异性识别循环肿瘤细胞；步骤0.3：加入过量的5％BSA溶液封闭磁性纳米颗粒表面修饰物的多余位点；步骤0.4：采用PBST清洗步骤0.3中得到的经表面修饰的磁性纳米颗粒，所制成的磁性纳米颗粒由3‑6nm的超小磁颗粒组成；或者按照下述方法制备所述表面修饰的磁性纳米颗粒：步骤0.1：将三氯化铁和柠檬酸三钠溶解在乙二醇溶液中得到混合溶液，向所述混合溶液中加入乙酸钠和聚丙烯酸，在室温下超声半小时直到溶液变成均相体系，并且反应在聚四氟乙烯衬底的铁氟龙高压反应釜中进行，150～195摄氏度条件下反应10小时以上，得到黑色沉淀物；利用乙醇和去离子水冲洗上述反应物，制得含铁氧化物的羧基化磁性纳米颗粒，在60摄氏度下干燥以备使用；步骤0.2：在步骤0.1中得到的所述磁性纳米颗粒表面修饰链霉亲和素；步骤0.3：使用生物素偶联的抗体或者适配体对步骤0.2中得到的所述磁性纳米颗粒进行表面修饰，所述抗体或者适配体能够特异性识别循环肿瘤细胞；步骤0.4：加入过量的5％BSA溶液封闭磁性纳米颗粒表面修饰物的多余位点；步骤0.5：采用PBST清洗步骤0.4中得到的经表面修饰的磁性纳米颗粒，所制成的磁性纳米颗粒由3‑6nm的超小磁颗粒组成；步骤1：将步骤0中任一所述的制备方法制备得到的表面修饰的磁性纳米颗粒加入到含有循环肿瘤细胞的血液或者缓冲液中，充分混合；步骤2：利用磁铁分离捕获了所述循环肿瘤细胞的所述表面修饰的磁性纳米颗粒；步骤3：清洗步骤2中捕获了所述循环肿瘤细胞的所述表面修饰的磁性纳米颗粒；步骤4：将步骤3中得到的捕获了所述循环肿瘤细胞的所述表面修饰的磁性纳米颗粒加入到代谢分子溶液中处理0‑24小时，并加入同等浓度的代谢分子同位素溶液充分混合，其中所述代谢分子包括糖类小分子和氨基酸小分子，所述糖类小分子包括葡萄糖和蔗糖，所述氨基酸小分子包括苯丙氨酸和谷氨酸；步骤5：将步骤4中得到的捕获了所述循环肿瘤细胞的所述表面修饰的磁性纳米颗粒在质谱靶板上制样，并在室温下干燥；步骤6：利用激光解析电离质谱，对步骤5中制备的样品进行质谱分析；步骤7：对质谱结果进行分析，得出结论。