[发明专利]一种海洋菌株及其胺脱氢酶催化制备手性胺的方法

摘要

本发明公开了一种海洋菌株及其胺脱氢酶催化制备手性胺的方法，属于生物法不对称合成手性化合物技术领域。本发明筛选得到来源于海洋的巴利阿里假单胞菌(Pseudomonas balearica)，在加入底物酮、氨基供体和辅助底物情况下，利用该菌株的全细胞及粗酶液催化酮不对称还原胺化制备手性胺。本发明确定了该菌株全细胞催化和粗酶液催化的不对称还原胺化的反应体系和反应条件。本发明在生物催化制备手性胺领域具有较好的工业应用前景，对于今后海洋新型生物催化剂的开发和手性胺的绿色合成方法的研究具有重要意义。

主权项

1.一种海洋菌株催化制备手性胺的方法，其特征在于：利用巴利阿里假单胞菌(Pseudomonas balearica)进行培养，制备全细胞或粗酶液；以酮为底物，加入氨基供体以及辅助底物用于辅酶循环再生，利用全细胞或者粗酶液催化不对称还原胺化得到产物手性胺；包括：1)菌株的培养：将巴利阿里假单胞菌(Pseudomonas balearica)以1％的接种量接种入216L培养基中培养；所述巴利阿里假单胞菌(Pseudomonas balearica)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，CGMCC编号为8967；所述216L培养基组成为10.0g/L蛋白胨,5.0g/L酵母粉,0.5g/L牛肉膏,0.5g/L柠檬酸钠,0.2g/L NH₄NO₃,1.0g/L醋酸钠，用海水配置；2)全细胞的制备：将步骤1)培养结束获得的发酵液，离心获得细胞，弃上清液，沉淀重悬，充分洗涤后离心，重复上述沉淀重悬‑洗涤‑离心若干次，获得细胞；将细胞用缓冲液配制成25～5000mg/L的细胞液；或2’)粗酶液的制备：将步骤1)培养结束获得的发酵液，离心获得细胞，弃上清液，沉淀重悬，充分洗涤后离心，重复上述沉淀重悬‑洗涤‑离心若干次，获得细胞；细胞用超声破碎仪破碎后离心，得到含有胺脱氢酶的粗酶液，用缓冲液调节粗酶液浓度至5～1500mg/L；3)全细胞催化：以步骤2)得到的25～5000mg/L的细胞液为基础配制全细胞催化体系：0.001～0.05mol/L酮，0.002～0.2mol/L氨基供体，0.001～0.2mol/L辅助底物，0.01～0.2mol/L的缓冲液，25～5000mg/L的细胞，反应体系pH 7～13，在0℃～70℃反应温度下，100～300rpm震荡反应，反应时间30～180小时，利用全细胞催化不对称还原胺化得到产物手性胺；或3’)粗酶液催化：以步骤2’)得到的5～1500mg/L的粗酶液为基础配制粗酶液催化体系：0.001～0.05mol/L酮，0.002～0.2mol/L氨基供体，0.001～0.2mol/L辅助底物，0.01～0.2mol/L的缓冲液，5～300mg/L的粗酶液，反应体系pH 8～12，在10℃～70℃反应温度下，100～300rpm震荡反应，反应时间10～90小时，利用粗酶液催化不对称还原胺化得到产物手性胺。