[发明专利]幽门螺杆菌多重基因检测体系及其试剂盒和应用

摘要

本发明涉及一种幽门螺杆菌多重基因检测体系及其试剂盒和应用。幽门螺杆菌多重基因检测体系包括21对引物，分别针对幽门螺杆菌的菌种鉴定基因（16S rRNA），毒力基因（cagA、vacA‑s1、vacA‑s2、vacA‑m1、vacA‑m2、iceA1、iceA2、dupA、oipA和luxS），耐药基因（23S rRNA的2143位点、rdxA的148位点、pbp1A的1777位点和gyrA的261位点的多态性），以及定量分析基因ureC和ß‑globin。本发明的幽门螺杆菌多重检测体系及其试剂盒不需要采用常规培养等步骤，可在同一反应体系内直接对组织样本进行菌种鉴定、定量、毒力和耐药性的同步检测和分析，弥补了常规检测方法通量低、耗时长和检出率低等缺点，第一时间为临床提供全面、精准、低成本的病原学诊断，为幽门螺杆菌感染的个体化诊断和精准治疗提供重要参考。

主权项

1.一种幽门螺杆菌多重基因检测体系，其特征在于：包括对菌种鉴定基因16S rRNA进行检测的引物，分别对毒力基因cagA、vacA‑s1、vacA‑s2、vacA‑m1、vacA‑m2、iceA1、iceA2、dupA、oipA和luxS进行检测的引物,分别对耐药基因23S rRNA的2143位点、rdxA的148位点、pbp1A的1777位点和gyrA的261位点的进行多态性检测的引物,以及分别对幽门螺杆菌的拷贝数进行定量分析的基因ureC和ß‑globin进行检测的引物；所述各引物的正向引物的5’端均设有正向通用引物序列，所述各引物的反向引物的5’端均设有反向通用引物序列；针对16S rRNA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，针对16S rRNA基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；针对cagA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，针对cagA基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；针对vacA‑s1或vacA‑s2基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，针对vacA‑s1或vacA‑s2基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；针对vacA‑m1基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示，针对vacA‑m1基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示；针对vacA‑m2基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.9所示，针对vacA‑m2基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.10所示；针对iceA1基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.11所示，针对iceA1基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.12所示；针对iceA2基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.13所示，针对iceA2基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.14所示；针对dupA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.15所示，针对dupA基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.16所示；针对oipA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.17所示，针对oipA基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.18所示；针对luxS基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.19所示，针对luxS基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.20所示；针对23S rRNA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.21所示，对应23S rRNA基因2143位点为碱基A的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.22所示，对应23S rRNA基因2143位点为碱基G的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.23所示；针对rdxA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.24所示，对应rdxA基因148位点为碱基C的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.25所示，对应rdxA基因148位点为碱基T的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.26所示；针对pbp1A基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.27所示，对应pbp1A基因1777位点为碱基A的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.28所示，对应pbp1A基因1777位点为碱基G的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.29所示；针对gyrA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.30所示，对应gyrA基因261位点为碱基C或T的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.31所示，对应gyrA基因261位点为碱基G或A的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.32所示；针对ureC基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.33所示，针对ureC基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.34所示；针对ß‑globin基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.35所示，以及针对ß‑globin基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.36所示；所述正向通用引物的核苷酸序列如SEQ ID No.37所示；所述反向通用引物的核苷酸序列如SEQ ID No.38所示。