[发明专利]一种固定炎症性肠病靶抗原细胞的方法

摘要

本发明公开了一种固定炎症性肠病靶抗原细胞的方法，将炎症性肠病自身抗体所识别的含有特异抗原分子的中性粒细胞固定在微孔板上，固定细胞的过程优化了细胞识别炎症性肠病自身抗体的特异性，从而细胞中的靶抗原分子可与炎症性肠病自身抗体紧密结合，形成抗原‑抗体结合物。该结合物可进而与偶联过氧化物酶的第二抗体形成抗原‑抗体‑二抗的复合物。复合物中的过氧化物酶可通过随后的酶底物生色反应来检测炎症性肠病自身抗体的含量。应用本发明建立的炎症性肠病自身抗体检测方法已对大量临床炎症性肠病可疑患者血清进行了检测，检测结果证实了本发明涉及的诊断试剂具有方法灵敏，准确，重复性好，性能稳定以及操作简便，适于临床推广应用等特点。

主权项

一种固定炎症性肠病靶抗原细胞的方法，其特征在于，使用一种细胞固定液将中心粒细胞固定在微孔板上，步骤如下；（1）中性粒细胞的提取：采集人外周新鲜血，肝素钠抗凝，全血稀释后加于分层液，20℃下离心25分钟，去除血浆、外周血单核细胞和分层液，并将含有[WU2] 的细胞层用缓冲液重悬，然后与等体积葡聚糖液混合，室温避光条件下沉降并收集中性粒细胞；残留红细胞在红细胞裂解液中裂解，再次离心去上清，得到纯化的粒细胞，并计算细胞纯度和浓度；（2）中性粒细胞固定：将实验需要的细胞加入微孔板中并在室温下静置，干燥；用含有特定比例的甲醇、乙醇及甲醛的细胞固定液固定细胞于微孔板，室温干燥，加封闭液封闭待用；所述细胞固定液包括如下重量份的成分：甲醇2～98重量份，乙醇 1～48重量份，甲醛1～48重量份。