[发明专利]一种利用迭代同源重组体内进化目标蛋白质的方法有效
| 申请号： | 201610079480.4 | 申请日： | 2016-02-04 |
| 公开（公告）号： | CN105820990B | 公开（公告）日： | 2019-10-11 |
| 发明（设计）人： | 徐志南;濮悦;黄磊;杭宝建;董昌;蔡瑾 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/54;C12N15/31 |
| 代理公司： | 浙江杭州金通专利事务所有限公司 33100 | 代理人： | 刘晓春 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种利用迭代同源重组体内进化目标蛋白质的方法。其特征在于：首先在体外通过两步PCR制备得到带突变的单链核苷酸并用DNase I酶切，回收80‑100nt片段构成目标蛋白质的单链核苷酸突变库；以此单链突变库转化大肠杆菌，通过λ‑Red同源重组技术建立含有目标蛋白质突变体的大肠杆菌菌群；再次将上述单链突变库转化含有目标蛋白质突变体的大肠杆菌菌群，形成更大库容量的大肠杆菌菌群；再次转化大肠杆菌的操作循环2‑6次，构建含有目标基因突变的大肠杆菌突变库；最后通过高效筛选或高通量筛选获得目标蛋白质突变体。这一技术可应用于微生物基因原位进化，提高酶催化活性，并应用于提高微生物代谢产物的产率。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 利用 同源 重组 体内 进化 目标 蛋白质 新方法 | ||
【主权项】：
1.一种DXS基因，其序列选自序列表第SEQ ID NO.5、NO.7、NO.9、NO.11、NO.13序列中的一种。
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