[发明专利]以MIC-1 cDNA为模板制备RNA探针的方法在审
| 申请号： | 201610087432.X | 申请日： | 2016-02-16 |
| 公开（公告）号： | CN105603093A | 公开（公告）日： | 2016-05-25 |
| 发明（设计）人： | 徐学明;鲁隼;冯俊清 | 申请（专利权）人： | 广州复能基因有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11;C12N15/10 |
| 代理公司： | 广州三环专利代理有限公司 44202 | 代理人： | 刘宇峰 |
| 地址： | 510663 广东省广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种以MIC-1cDNA为模板制备RNA探针的方法。该方法包括：针对MIC-1mRNA序列筛选多个靶序列，对于每个靶序列设计至少一对引物，所述引物的PCR扩增产物为多重DNA片段，所述多重DNA片段能包括所有靶序列；从MIC-1cDNA质粒中，采用上述引物，通过PCR扩增得到所述多重DNA片段，纯化后混合，作为模板；加入RNA聚合酶和带有生物素标记的UTP进行反应，将UTP掺入产物，纯化后得到RNA探针。本发明得到的cRNA探针能够全部覆盖所有靶序列，即MIC-1mRNA序列。本发明探针制备方法简化了探针制备步骤，大幅度缩短整个实验时间，探针特异性和稳定性更强，背景信号更低且灵敏度更高。在此基础上，本发明提供了一种快速检测肿瘤相关的MIC-1表达的试剂盒。 | ||
| 搜索关键词： | mic cdna 模板 制备 rna 探针 方法 | ||
【主权项】：
一种以MIC‑1cDNA为模板制备RNA探针的方法，其特征在于，包括以下步骤：A.针对MIC‑1mRNA序列筛选多个靶序列，对于每个靶序列设计至少一对引物，所述引物的PCR扩增产物为多重DNA片段，所述多重DNA片段能包括所有靶序列；B.从MIC‑1cDNA质粒中，采用步骤A的所述引物，通过PCR扩增得到所述多重DNA片段，纯化后混合，作为模板；C.加入RNA聚合酶和带有生物素标记的UTP进行反应，将UTP掺入产物，纯化后得到RNA探针。
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