[发明专利]用于质地紧密坚硬植物材料的石蜡切片制作方法

摘要

本发明涉及植物样本组织石蜡切片技术领域，尤其是一种用于质地紧密坚硬的稻麦等植物材料发育后期籽粒的石蜡切片制作方法。一种用于质地紧密坚硬植物材料的石蜡切片制作方法，包括以下步骤（1）固定取授粉后不同时期的植物籽粒材料进行纵切或横切，放入固定液中室温固定3～5h；（2）脱水利用移液枪将上述固定液吸出,先后依次加入梯度为30%、50%、75%、95%和100%浓度的酒精进行脱水；（3）透明利用吸液枪将上述酒精吸出后，使用氯仿做透明剂；（4）浸蜡；（5）包埋与切片。本发明可操作性强、方法简便、经济实用，能够解决发育后期籽粒切片易碎问题，容易切出发育后期籽粒的完整石蜡切片。

主权项

一种用于质地紧密坚硬植物材料的石蜡切片制作方法，其特征在于包括以下步骤:(一)、固定:取授粉后不同时期的植物籽粒材料进行纵切或横切，放入容器中的固定液中，使用真空干燥器抽真空，至所有籽粒材料都沉入容器底部，室温固定3～5h；（二）、脱水：利用移液枪将上述固定液吸出,先后依次加入梯度为30%、50%、75%、95%和100%浓度的酒精进行脱水：30%酒精脱水3～5次，每隔20～30min更换一次酒精；50%酒精脱水3～5次，每隔20～30min更换一次酒精；之后将样品转移至摇床上或者每隔8～12min晃一下容器，75%酒精脱水3～5次，每隔40～50min更换一次酒精；95%酒精脱水3～5次，每隔40～50min更换一次酒精；100%纯酒精脱水3～5次，每隔40～50min更换一次酒精；（三）、透明：利用吸液枪将上述酒精吸出后，使用氯仿做透明剂，加入体积比为酒精：氯仿=3：1溶液静置3～4h，抽真空至所有材料沉底；之后利用吸液枪将溶液吸出，加入体积比为酒精：氯仿=1：1溶液，静置3～4h，抽真空至所有材料沉底；再次利用吸液枪将溶液吸出，加入体积比为酒精：氯仿=1：3溶液，静置3～4h，抽真空至所有材料沉底；再次利用吸液枪将溶液吸出，加入纯氯仿静置2～3d，抽真空至所有材料沉底；（四）、浸蜡：利用吸液枪将所述纯氯仿吸出后，加入体积比为氯仿：石蜡=3：1的混合液，在40～42℃下保温4～5h；之后,利用吸液枪将上述氯仿与石蜡混合液吸出后，加入体积比为氯仿：石蜡=1：1，在40～42℃下保温4～5h；之后,利用吸液枪将上述氯仿与石蜡混合液吸出后，加入体积比为氯仿：石蜡=1：3的混合液,在45～47℃下保温4～5h；针对授粉后21d之前的材料,利用纯石蜡在55～57℃下保温3～4d；针对授粉后21d以后的材料，利用纯石蜡在55～57℃保温3～5d，浸蜡期间更换一次纯石蜡；（五）、包埋与切片：所使用的籽粒材料用纸盒或石蜡包埋盒按常规方法包埋，针对授粉后21d之前的材料直接按常规方法在石蜡切片机上切片，授粉后21d以后的材料石蜡包埋后须使用刀片切出材料横截面，然后将蜡块倒扣于DEPC水中4～6℃软化过夜，然后再进行切片，上述所有籽粒材料均切成厚度范围8～25μm 的切片。