[发明专利]一种利用特征诊断序列制备牛毛检测抗体的方法

摘要

本发明涉及文物检测技术领域，公开了一种利用特征诊断序列制备牛毛检测抗体的方法，采用如下步骤：a.特征诊断序列的合成；b.特征诊断序列与载体的偶联；c.初次免疫；d.抗血清制备；e.牛毛检测抗体的纯化。本发明方法制备的牛毛检测抗体具有高灵敏性和高特异性。

主权项

一种利用特征诊断序列制备牛毛检测抗体的方法，其特征在于采用如下步骤：a.特征诊断序列的合成：采用Fmoc多肽固相合成法合成特征诊断序列，并在所述特征诊断序列的C端增加半胱氨酸残基用于偶联反应；b.特征诊断序列与载体的偶联：选择血蓝蛋白作为载体蛋白，用SPDP连接法将所述特征诊断序列与所述血蓝蛋白进行偶联制得完全抗原；c.初次免疫：用生理盐水将步骤b制得的完全抗原进行稀释，将稀释后的完全抗原与完全弗氏佐剂按体积比1:(0.8‑1.1)混合，然后加入青霉素和链霉素进行乳化处理，得到初次免疫抗原乳化液；使用初次免疫抗原乳化液对兔子进行皮下多点注射，进行初次免疫；d.抗血清制备：用生理盐水将步骤b得到的完全抗原进行稀释，将稀释后的完全抗原与不完全弗氏佐剂按体积比1:(0.8‑1.1)混合，然后加入青霉素和链霉素乳化处理，得到强免疫抗原乳化液；在初次免疫后的第3周和第5周时，分别使用强免疫抗原乳化液对兔子进行皮下多点注射，进行加强免疫；在进行初次免疫后的第7周和第9周时，重复进行加强免疫，当兔子血样中的抗体效价达到1：20000时，收集兔子血液，并分离制得抗血清；e.牛毛检测抗体的纯化：将蛋白A填料与磷酸盐缓冲溶液混合，搅拌后抽真空20‑25min，得到无气泡的蛋白A填料液；将蛋白A填料液在无气泡条件下加入到玻璃柱中，得到蛋白柱；对蛋白柱进行清洗；对上述制得的抗血清进行稀释，稀释后加入到蛋白柱中进行上样，重复上样一次；对蛋白柱再次清洗，用甘氨酸溶液对抗体进行洗脱，洗脱后清洗蛋白柱，制得抗体。