[发明专利]一种以甲基丙烯酸为单体的胰蛋白酶表面印迹微球的制备方法

摘要

本发明提供一种以甲基丙烯酸为功能单体制备胰蛋白酶分子表面印迹微球的方法，通过交联聚乙烯醇微球表面的羟基与甲基丙烯酰氯之间的酯化反应，获得表面含有大量可聚合双键的改性微球；在缓冲溶液中，甲基丙烯酸自动结合在模板胰蛋白酶大分子周围形成单体‑模板复合体；而引发剂体系过硫酸铵/亚硫酸氢钠产生的自由基，使包围在胰蛋白酶周围的单体甲基丙烯酸与交联剂N,N'‑亚甲基双丙烯酰胺在改性微球表面发生接枝交联聚合反应，形成包裹有模板胰蛋白酶的印迹微球产物，除去模板后便得到了胰蛋白酶分子表面印迹微球，该印迹微球对于胰蛋白酶具有特异的识别选择性，重复使用性能好、稳定性高，对于胰蛋白酶分子表面印迹微球的制备具有积极的参考价值。

主权项

1.一种以甲基丙烯酸为单体的胰蛋白酶表面印迹微球的制备方法，其步骤如下：步骤一，以交联聚乙烯醇微球为基质，使其在无水丙酮中浸泡12小时充分溶胀后，再以甲基丙烯酰氯为试剂，通过其酰氯基团与交联聚乙烯醇微球表面羟基之间快速的酯化反应，将交联聚乙烯醇微球改性为表面键合有大量甲基丙烯酰基的改性微球MAO‑CPVA，所述交联聚乙烯醇微球的质量百分比为3~8%，所述甲基丙烯酰氯的体积百分比为4~12%，所述酯化反应温度为25~50℃，反应时间为7~14h；步骤二，将甲基丙烯酸和胰蛋白酶溶解于磷酸盐缓冲液中，使其相互作用一定时间后形成主‑客体复合物溶液，所述甲基丙烯酸的体积百分比为3~5%，所述单体甲基丙烯酸与模板胰蛋白酶的摩尔比为400:1~600:1；步骤三，将改性微球MAO‑CPVA浸泡于步骤二的复合物溶液中，使其充分溶胀后，加入交联剂N,N′‑亚甲基双丙烯酰胺，在通氮气并加入引发剂的条件下使其发生交联聚合反应，制备胰蛋白酶分子表面印迹微球，所述改性微球MAO‑CPVA的质量百分比为1.5~6%，交联剂N,N′‑亚甲基双丙烯酰胺的质量百分比为0.1~0.4%，引发剂过硫酸铵的质量百分比为0.04~0.1%，亚硫酸氢钠的质量百分比为0.08~0.25%，所述聚合反应的温度为30~45℃，反应时间为10~15h；步骤四，将步骤三制备的分子表面印迹微球用氯化钠水溶液进行反复的洗脱，直至在洗脱液中检验不到胰蛋白酶为止，然后用蒸馏水冲洗干净，真空干燥后即得表面含有大量模板孔穴的胰蛋白酶分子表面印迹微球，所述洗脱液氯化钠的摩尔浓度为2~3mol/L。