[发明专利]一种转换酵母交配型的方法有效
| 申请号： | 201610102424.8 | 申请日： | 2016-02-23 |
| 公开（公告）号： | CN105483034B | 公开（公告）日： | 2019-08-06 |
| 发明（设计）人： | 元英进;谢泽雄;李炳志 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/81;C12N15/66 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 赵青朵 |
| 地址： | 300072 天津市*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明涉及分子生物学领域，具体涉及一种转换酵母交配型的方法。本发明所述转换酵母交配型的方法，利用Cas9蛋白在MAT基因座处产生双链断裂，外源导入的MAT片段对该双链断裂进行修补，转换酿酒酵母交配型。本发明所述转换酵母交配型的方法可高效、快速转换酿酒酵母单倍体交配型，不依赖酿酒酵母自身染色体结构HMLα和HMRa，无需经过二倍体酿酒酵母阶段，且无需对待转换酿酒酵母菌株进行诱导等处理，直接获得相反交配型酿酒酵母菌株，实验周期短。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 转换 酵母 交配 方法 | ||
【主权项】：
1.一种转换酿酒酵母交配型的方法，其特征在于，利用Cas9蛋白在MAT基因座处产生双链断裂，外源导入的MAT片段对该双链断裂进行修补，转换酿酒酵母交配型；具体操作为将酿酒酵母感受态细胞与转化体系混合进行酵母转化，然后筛选，分纯；其中所述酿酒酵母感受态细胞为所述感受态细胞为包含质粒pRS415+Cas9的酵母菌株BY4741感受态细胞或包含质粒pRS415+Cas9的酵母菌株BY4742感受态细胞；所述转化体系包含质粒DNA，所述质粒DNA包括guide‑RNA质粒和限制性内切酶NsiI消化的MAT基因表达盒质粒片段；所述guide‑RNA质粒为pRS426+SNR52P‑gRNA.MATa或pRS426+SNR52P‑gRNA.MATα；所述pRS426+SNR52P‑gRNA.MATa质粒的protospacer如SEQ ID NO:1所示，所述pRS426+SNR52P‑gRNA.MATα质粒的protospacer如SEQ ID NO:4所示；所述MAT基因表达盒质粒为pTOPO+MATα或pTOPO+MATa。
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