[发明专利]基于适体的靶向激活循环放大SPR检测蛋白质的方法

摘要

本发明公开了一种基于适体的靶向激活循环放大SPR检测蛋白质的方法，本文基于适体与靶分子的结构互变性质，构建了靶向激活双重循环放大的SPR检测系统用于溶菌酶的检测。将靶分子与适体的特异性识别作用转化成双重循环放大反应的切入点，从而引发靶分子的聚合替换源头放大和DNA链的聚合剪切放大反应，提高了反应的放大效率及选择性，以溶菌酶作为目标分析物，生物功能化的量子点探针为信号标记，利用表面等离子共振检测技术实现了溶菌酶的快速、灵敏检测，检测限可达76fM。并成功应用于人血清实际样品中溶菌酶的分析。该方法适用范围广、选择性强、操作便捷，在蛋白质分析及临床诊断方面具有广阔的应用前景。

主权项

一种基于适体的靶向激活循环放大SPR检测蛋白质的方法，其特征是：步骤如下：(1)基底上发夹结构的检测探针DNA S1既含有靶蛋白的适体序列，又具有剪切酶的识别序列，当待测系统中具有靶蛋白时，靶蛋白与DNA S1上的适体序列部分特异性结合，使发夹结构的检测探针被打开，发夹结构的检测探针DNA S1上3’暴露出来；(2)纳米金生物条码探针上组装了两种DNA分子，分别是捕获量子点信号探针的捕获链DNAS3和能够与打开的发夹结构探针杂交互补，充当聚合反应引物的DNA S2，所述DNA S2与步骤(1)打开的发夹探针互补杂交后，以发夹探针为模板链复制，将靶蛋白质从DNA S1上替换下来，替换下来的靶蛋白与其他的发夹探针结合，引发新的靶分子的替换聚合反应，同时，由于发夹结构的检测探针上还具有剪切酶的识别序列，当引物沿模板链聚合生长形成双链结构时，在内切酶的作用下，在双链的识别位点处在模板链对应的互补序列上形成缺口，随后再在DNA聚合酶的作用下，引物链从缺口处继续沿模板链聚合生长，将形成缺口的另一段单链替换下来，释放出的单链DNA由于具有较多与模板链互补的序列，也能和其他的发夹探针互补杂交，将发夹打开，从而引发新的核酸链替代聚合反应，结合靶分子的替换聚合循环放大，形成了双重循环放大体系；(3)将步骤(2)反应结束后得到的基底进行表面等离子共振检测。