[发明专利]一种磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3的定量分析试剂盒及其制备方法

摘要

一种磷脂酰肌醇蛋白聚糖‑3的定量分析试剂盒，包括GPC3标准品、吖啶酯标记的磷脂酰肌醇蛋白聚糖‑3抗体溶液、偶联有磷脂酰肌醇蛋白聚糖‑3抗体的纳米磁微球溶液。本发明还提供了该试剂盒的制作方法。本发明以吖啶酯为发光标记物的GPC3纳米磁微球化学发光免疫分析测定试剂盒，不仅具有灵敏度高、线性范围宽、特异性好、标记物稳定、成本低等特点，而且其检测程序亦简便、快速，只需微量样本即可检测。

主权项

1.一种磷脂酰肌醇蛋白聚糖‑3的定量分析试剂盒的制备方法，所述试剂盒包括如下：(1)GPC3标准品；(2)吖啶酯标记的磷脂酰肌醇蛋白聚糖‑3抗体溶液；(3)偶联有磷脂酰肌醇蛋白聚糖‑3抗体的纳米磁微球溶液；(4)发光液；该试剂盒由如下步骤制得：(1)GPC3标准品的制备：用标准品缓冲液将GPC3配制成0ng/mL、0.5ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、20.0ng/mL、100.0ng/mL系列浓度；所述标准品缓冲液包括质量比为3％BSA、0.6％NaCl、0.1％TritonX‑100或Tween20、0.05％Proclin‑300、余量的0.2mol/L磷酸缓冲液，所述标准品缓冲液的pH为7.0；(2)吖啶酯标记的磷脂酰肌醇蛋白聚糖‑3抗体溶液的制备：①、取GPC3抗体溶于，pH为7.0浓度为0.2mol/L的磷酸缓冲液中，至终浓度为5mg/L；②、向步骤①处理后的GPC3抗体溶液加入吖啶酯至吖啶酯终浓度为0.25mg/L，避光静置10小时，收集标记有吖啶酯的GPC3抗体溶液；(3)偶联有磷脂酰肌醇蛋白聚糖‑3抗体的纳米磁微球溶液的制备：ⅰ、取GPC3抗体溶于，pH为5.0浓度为0.2mol/L的MES溶液中，至终浓度为5mg/L；ⅱ、取1重量份纳米磁微球，加入2重量份的偶联剂一和3重量份偶联剂二，置于磁微球混合器旋转30分钟，除去上清；再加入连接缓冲液洗涤纳米磁微球，除去上清；所述偶联剂一包括质量比为1％NHS和余量的浓度为0.2mol/L的pH为5.0的MES；所述偶联剂二包括质量比为1％的EDC和余量的pH为5.0的0.2mol/L的MES溶液；所述连接缓冲液为pH为5.0的0.2mol/L MES溶液；所述纳米磁微球为直径为3μm、表面带羧基的超顺磁性的纳米磁微球；ⅲ、将ⅰ步骤处理后的GPC3抗体溶液和ⅱ步骤处理后的纳米磁微球按质量比1:40混匀形成GPC3抗体纳米磁微球混合液，放置磁微球混合器旋转12小时，再用3倍GPC3抗体纳米磁微球混合液的体积的包被缓冲液置换连接缓冲液；获得偶联有磷脂酰肌醇蛋白聚糖‑3抗体的纳米磁微球溶液；所述包被缓冲液包括质量比为1％BSA、0.5％NaCl、0.1％TritonX‑100或Tween20、0.05％Proclin‑300以及余量的30mmol/L Tris‑HCl，所述包被缓冲液pH为7.0。