[发明专利]一种槲蕨的离体保存方法

摘要

本发明公开了一种槲蕨的离体保存方法，包括槲蕨的组培两步成苗，再利用组培两步成苗得到具有4~6片叶的试管苗，接种到保存培养基进行离体保存，本发明保存培养基为1/2MS+AC0.3%+蔗糖4.5%+琼脂0.4%。培养基的pH值为5.8，温度为23±1°C，光照强度1400~1600lx，光照时间为8~10小时/天。利用本发明的方法可在短期内提供大量槲蕨的优质种苗，同时减少了配制培养基和转瓶的步骤，节约了大量人力物力，因此简单易行、生产成本降低，并且有效解决了槲蕨种质资源保存及规模化育苗问题。

主权项

一种槲蕨的离体保存方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）孢子萌发培养：取槲蕨成熟干作为外植体，在75%乙醇中浸泡30~45s，无菌水冲洗2~3次，投入到添加2滴吐温的0.1%升汞4min，再用无菌水冲洗2~3次，再次投入到添加2滴吐温的0.1%升汞4min，最后用无菌水冲洗2~3次后切割为0.5~1.0cm长接种在诱导孢子萌发培养基上，培养10~14天，孢子萌发可见嫩绿色斑点，并逐渐变多变绿，30~40天出现大量原叶体，60~70天出现大量孢子体，成蔟呈翠绿色；所述的萌发培养基为：MS+TDZ1.0mg/l+NAA0.5 mg/l +AC0.5%+蔗糖2.5% +琼脂0.4%；所述培养基的pH值为5.8，培养温度为24~28°C，光照强度1400~2000lx，光照时间为12~14小时/天；（2）孢子体繁殖生根培养：经80~90天培养，孢子体长成具有2片针叶，高2cm芽苗，将芽苗取下接种到繁殖生根培养基上培养，30~45天，无菌苗繁殖系数4~7，株高4.0~6.0cm，平均根数4以上，平均根长4cm以上；所述的繁殖生根培养基为：MS+IAA1.0mg/l+6‑BA0.6mg/l +AC0.5%+蔗糖3.5%+琼脂0.4%；所述培养基的pH值为5.8，温度为22~25°C，光照强度2600~2800lx，光照时间为12~14小时/天；（3）试管苗离体保存：将由孢子体繁殖生根获得的具有4~6片叶的试管苗，接种到保存培养基进行离体保存；所述的保存培养基为1/2MS+ CCC1.0mg/l +AC1.0%+蔗糖4.5%+琼脂0.4%；所述培养基的pH值为5.8，温度为23±1°C，光照强度1200~1600lx，光照时间为6~8小时/天。