[发明专利]一种降血糖及调节肠道菌群的糖基化浒苔寡糖制备方法

摘要

本发明公开一种降血糖及调节肠道菌群的糖基化浒苔寡糖制备方法，其制备方法为：浒苔干燥后超微粉碎，经乙醇回流提取工艺，浓缩、干燥粉碎后得到脱脂的浒苔粉末，经脱蛋白、去除多糖及色素后，再将岩藻糖基转移酶加入含有浒苔寡糖的反应体系中，进行岩藻糖基化反应，制备得到所述的岩藻糖基化浒苔寡糖。经证实糖基化浒苔寡糖对α‑葡萄糖苷酶具有强抑制活性，显著提高肠道益生菌数量，可用于制备防治糖尿病改善肠道菌群等代谢性疾病的药品或保健品。

主权项

1.一种糖基化浒苔活性寡糖在制备防治糖尿病改善肠道菌群代谢性疾病的药品或保健品中的应用，其特征在于：所述糖基化浒苔活性寡糖制备方法包括如下：/n（1）取干燥、超微粉碎、过80-100目筛的浒苔粉末，按重量g与体积mL之比1:20-30加入质量浓度为60%-80%的乙醇溶液，60-90℃下200-400W超声提取1-1.5小时，提取结束后，进行过滤，将滤渣重复上述步骤进行2-3次提取，合并提取液，将获得的滤液混合后进行减压浓缩至原体积的3-8%，真空冷冻干燥后粉碎，过50-80目筛；/n（2）向步骤（1）所得粉末中加入蒸馏水，其中粉末质量g与蒸馏水mL体积比为1:10-20，进行搅拌复溶，用Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法中一种或几种除蛋白3-5次；/n（3）将步骤（2）所得到的溶液，通过HPD-826大孔吸附树脂填充柱，洗脱液进一步过非极性吸附剂活性炭，活性炭使用量与洗脱液按重量体积比1:30-50去除色素，于摇床中60-80r/min振荡1-2h，4000-6000rpm离心15-20 min，收集上清液；/n（4）将步骤（3）得到的上清液旋蒸浓缩至原体积的3-8%，然后按体积比1:3-4加入质量浓度为95%的乙醇，搅拌后放入4-10℃条件下静置24 h，6000-8000rpm离心15-20min，取上清液减压浓缩、冷冻干燥得浒苔功能性寡糖的固体，粉末后过50-80目筛；/n（5）将步骤（4）中浒苔寡糖粗品粉末加蒸馏水溶解，粉末质量g与水mL体积比为1:20-50，溶液用截留分子量2000D透析袋处理，收集透析液，在37-40℃及转速为60-80 r/min条件下旋转蒸发，浓缩至原体积的1/10-1/5；浓缩液采用截留分子量500D透析袋处理，将截留液冷冻干燥，制备得到未糖基化浒苔寡糖精制品；/n（6）步骤（5）得到的浒苔寡糖精制品按质量mg与体积mL之比1:1-2溶解于蒸馏水中，将岩藻糖基转移酶加入到反应体系中进行生物反应，岩藻糖基转移酶用量与反应体系按质量mg与体积mL比1:3-5，反应体系中浒苔寡糖与二磷酸鸟苷-岩藻糖浓度比1:1.0-1.5、MgCl₂终浓度为15-20 mM、pH6.5-8.0，置于35-40℃温度，80-100 r/min摇床条件下反应24-36 h；/n（7）将步骤（6）反应体系按体积比1:1添加95%乙醇，终止反应并沉淀蛋白，8000-10000r/min离心15-20min去除沉淀，收集上清浓缩，真空冷冻干燥后得到糖基化浒苔活性寡糖粗品；/n（8）将步骤（7）所得粗品溶解后过Bio-Gel P-2聚丙烯酰胺凝胶，蒸馏水洗脱，经3,5-二硝基水杨酸法测定收集寡糖组分，浓缩后真空冷冻干燥得到糖基化浒苔活性寡糖。/n