[发明专利]一种促进肠道益生菌增殖的唾液酸化浒苔寡糖制备方法

摘要

本发明公开了一种促进肠道益生菌增殖的唾液酸化浒苔寡糖制备方法。浒苔干燥后超微粉碎，利用乙醇回流提取工艺，得到干燥脱脂的浒苔粉末，经微波辅助提取、脱蛋白及去除多糖和色素后获得浒苔寡糖，再将唾液酸转移酶加入到含有浒苔寡糖的反应体系中，进行糖基化反应，制备得到所述的唾液酸化浒苔寡糖，该寡糖能显著提高肠道益生菌数量，可用于制备改善肠道菌群的药品或保健品。

主权项

1.唾液酸化浒苔寡糖在制备改善肠道菌群的药品或保健品上的应用，所述唾液酸化浒苔寡糖的制备方法，包括如下步骤：（1）将浒苔干燥后超微粉碎过80‑100目筛得干粉末，向浒苔干粉末中加入体积浓度60‑80%乙醇回流提取1‑2 h，干粉重量g与乙醇体积mL比为1:20‑30，回流结束后回收去除乙醇循环使用，烘干，粉碎得到干燥脱脂的浒苔粉末；（2）向步骤（1）制得的脱脂浒苔粉末中加入蒸馏水，其中浒苔质量g与蒸馏水mL体积比为1:20‑25，60‑70℃萃取温度下450‑600 W微波辅助提取2‑3 min，提取结束后，进行过滤，将滤渣重复上述步骤进行2‑3次提取，将获得的滤液混合后进行浓缩，抽滤，滤液减压浓缩至原体积的3‑8%，真空冷冻干燥后粉碎；（3）向步骤（2）所得粉末中加入蒸馏水，其中粉末质量g与蒸馏水mL体积比为1:10‑20，进行搅拌复溶，用Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法中一种或几种除蛋白5‑8次；（4）将步骤（3）所得到的溶液，通过HPD‑826大孔吸附树脂填充柱，洗脱液进一步经过非极性吸附剂活性炭，活性炭使用量g与洗脱液mL按重量体积比1:30‑50去除色素，将活性炭与洗脱液于摇床中60‑80 r/min振荡1‑2h，6000‑8000rpm离心20‑30 min，收集上清液；（5）将步骤（4）得到的提上清液旋蒸浓缩至原体积的3‑8%，按体积比1:3‑4加入质量浓度为95%的乙醇，搅拌后放入4‑10℃条件下静置24 h，6000‑8000rpm离心20‑30 min，取上清液减压浓缩、冷冻干燥得浒苔寡糖的固体粉末；（6）将步骤（5）中浒苔寡糖，按干粉重量mg与蒸馏水mL体积比为1:5‑10溶解，溶液采用截留分子量2000D透析袋处理，收集透析液，在37‑40℃及转速为60‑80 r/min条件下旋转蒸发，浓缩至原体积的1/10‑1/5；浓缩液采用截留分子量500D透析袋处理，将截留液冷冻干燥，制备得到未唾液酸化浒苔寡糖精制品；（7）步骤（6）得到的浒苔寡糖精制品按质量mg与体积mL比1:0.5‑1.0溶解于蒸馏水中，将唾液酸转移酶加入到反应体系中进行生物反应，唾液酸转移酶用量mg与反应体系按质量与体积mL比1:3‑5，反应体系中浒苔寡糖与胞苷一磷酸‑‑N‑乙酰神经氨酸质量浓度比1:1.0‑1.5，MgCl₂质量终浓度为15‑20 mM，pH6.5‑8.0，置于35‑40℃温度，80‑100rmp摇床条件下反应24‑36h；（8）将步骤（7）反应体系按体积比1:1添加体积浓度95%乙醇，终止反应并沉淀蛋白，6000‑8000rpm离心20‑30 min去除沉淀，收集上清浓缩，真空冷冻干燥后得到唾液酸化浒苔功能性寡糖粗品；（9）将步骤（8）所得粗品溶解后过Bio‑Gel P‑2聚丙烯酰胺凝胶，蒸馏水洗脱，经3,5‑二硝基水杨酸法测定收集寡糖组分；（10）将步骤（9）中收集的浒苔寡糖组分溶液采用截留分子量500D透析袋处理，将截留液冷冻干燥，制备得到唾液酸化浒苔寡糖。