[发明专利]HLA-A0201限制性抗PSA抗原特异性CTL的制备方法

摘要

本发明属于生物技术开发与应用研究领域，公开了HLA-A0201限制性抗PSA抗原特异性CTL的制备方法。该方法通过单采收集外周单个核细胞，富集纯化CD8+T淋巴细胞；用负载HLA-A0201限制性PSA抗原多肽的成熟树突状细胞刺激CD8+T淋巴细胞，用rhIL-2和rhIL-7联合促进T细胞生长；用Tetramer标记法和流式细胞分选术纯化目标CTL；用固相包被的抗人CD3单抗和IL-2刺激目标CTL的生长；加γ射线辐照后的自体PBMC增强目标CTL的活化；加rhIL-15培育扩增，收集鉴定。本方法制备的目标CTL具备高纯度，高增殖能力，高杀伤活性，高比例CTL_-CM，用于肿瘤等免疫治疗。

主权项

HLA‑A0201限制性抗PSA抗原特异性CTL制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤：a.CTL前体细胞来源细胞的富集与纯化：单采收集外周单个核细胞作为CTL前体细胞来源；采用临床级阴性磁珠分离法，从收集外周单个核细胞中富集、纯化CTL前体细胞即CD8+T淋巴细胞；b.目标CTL诱导与第一轮扩增：用负载HLA‑A0201限制性PSA抗原多肽的成熟树突状细胞刺激CD8+T淋巴细胞，同时加入rhIL‑2和rhIL‑7两种细胞因子联合促进T细胞生长；第二周再重复刺激一次，完成第一轮扩增；c.目标CTL纯化方法：采用Tetramer标记方法和流式细胞分选术纯化目标CTL，即选择Tetramer+CD8+T淋巴细胞；d.目标CTL第二轮扩增：采用固相包被的anti‑human‑CD3mAb和rhIL‑2刺激目标CTL的生长；加入经γ射线辐照后的自体外周单个核细胞增强对目标CTL的活化；加入rhIL‑15继续培育，完成第二轮扩增，收集鉴定。