[发明专利]一种利用乙酰乳酸脱羧酶催化脱羧测定乙酰乳酸合成酶活性的方法及应用有效
| 申请号： | 201610117777.5 | 申请日： | 2016-03-02 |
| 公开（公告）号： | CN105671129B | 公开（公告）日： | 2019-02-26 |
| 发明（设计）人： | 梁五生;温雪玮;武斌;陈泱泱;娄永根 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12Q1/527 | 分类号： | C12Q1/527 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 黄平英 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用乙酰乳酸脱羧酶催化脱羧测定乙酰乳酸合成酶活性的方法，包括：(1)将乙酰乳酸合成酶粗酶液、乙酰乳酸脱羧酶、蒸馏水与含丙酮酸钠的反应缓冲液混匀后进行酶促反应，得酶促反应液；(2)向酶促反应液和空白对照液中加入显色剂进行显色反应，显色后离心取上清液，用分光光度计检测酶促反应液530nm波长处的吸光度A530，按如下公式“乙酰乳酸合成酶活性＝ΔA530/([Pr]·t)”计算乙酰乳酸合成酶粗酶液的酶活性。本发明方法可以广泛用于植物、真菌和细菌等多种生物材料中乙酰乳酸合成酶活性的测定，并可用于乙酰乳酸合成酶抑制剂的筛选或鉴定。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 利用 乙酰 乳酸 脱羧酶 催化 测定 合成 活性 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.一种利用乙酰乳酸脱羧酶催化脱羧测定乙酰乳酸合成酶活性的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将乙酰乳酸合成酶粗酶液、乙酰乳酸脱羧酶、蒸馏水与含丙酮酸钠的反应缓冲液混匀后进行酶促反应，得酶促反应液；酶促反应条件为：36～38℃水浴条件下反应0.8～1.2h；以乙酰乳酸合成酶粗酶液为1mL计，乙酰乳酸脱羧酶的添加量为8～12μl、含丙酮酸钠的反应缓冲液的添加量为0.8～1.2mL，蒸馏水的添加量为45～55μl；(2)向酶促反应液和空白对照液中加入显色剂进行显色反应，显色后离心取上清液，用分光光度计检测酶促反应液在530nm波长处的吸光度A530，按如下公式计算乙酰乳酸合成酶粗酶液的酶活性：乙酰乳酸合成酶活性＝ΔA530/([Pr]·t)式中ΔA530是以空白对照液调零后测得的A530值；[Pr]是乙酰乳酸合成酶粗酶液中所含蛋白量，以mg为单位；t是酶促反应时间，以h为单位。
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