[发明专利]一种小叶章茎段组培快繁的方法

摘要

一种小叶章茎段组培快繁的方法，本发明属于植物组织培养技术领域，尤其涉及一种小叶章茎段组培快繁的方法。本发明的目的是为了解决野生状态小叶章的种子萌芽率低和结实率低的问题。本发明的小叶章茎段组培快繁的方法按以下步骤进行一、茎段外植体的采集、二、茎段外植体的消毒、三、诱导培养、四、增殖培养、五、壮苗伸长培养、六、生根培养、七、炼苗移栽。本发明采用茎段直接再生不定芽具有培养时间短(能在3个月到4个月之间成苗)，不容易发生变异等优点且本发明的小叶章茎段组培快繁方法，外植体的腋芽诱导速度快；诱导率高。本发明的培养方法用于植物快速繁殖。

主权项

一种小叶章茎段组培快繁的方法，其特征在于：该方法按以下步骤进行：一、茎段外植体的采集：选取当年新生无病虫害和生长健壮的幼嫩茎段作为外植体；二、茎段外植体的消毒：将采集的外植体去除叶片后，剪成3cm‑4cm长的茎段，用自来水冲洗8min～10min，再用适量的洗洁精水冲洗2～3遍，然后用自来水冲洗干净后置于超净工作台中，用70％～75％酒精浸泡30s～40s，无菌水冲洗2～3次；用0.1％HgCl2溶液消毒2min、4min、6min、8min、10min和15min，期间不断摇晃，无菌水冲洗5～6次，用无菌滤纸吸干表面水分，备用；三、诱导培养：将消毒好的茎段接种于无菌的诱导培养基中，诱导培养出腋芽；所述的诱导培养基是由0.1mg/L～0.5mg/L 6‑BA、0.1mg/L～0.2mg/L NAA、30g/L～35g/L蔗糖和6g/L～7g/L琼脂粉组成的1/2MS培养基，pH值为5.5～5.8；四、增殖培养：将腋芽切下，切取长度为1.5cm～2cm，然后将腋芽转接到增殖培养基中培养；连续继代培养2次～3次，腋芽分化形成增殖苗；所述的增殖培养基是由0.5mg/L～1.0mg/L2‑iP、0.1mg/L～0.5mg/L6‑BA、0.1mg/L～0.2mg/L NAA、30g/L～35g/L蔗糖和6g/L～7g/L琼脂粉组成的1/2MS培养基，pH值为5.5～5.8；培养条件：温度25±2℃，光照强度30μmol·m‑2·s‑1～40μmol·m‑2·s‑1，光照14h/d～16h/d；诱导培养28d～30d；五、壮苗伸长培养：将步骤四得到的增殖苗的丛生芽切下转接到伸长培养基中，得到伸长的丛生芽；所述的伸长培养基是由0.1mg/L～0.5mg/L GA3、0.1mg/L～0.2mg/L NAA、30g/L～35g/L蔗糖和6g/L～7g/L琼脂粉组成的1/2MS培养基，pH值为5.5～5.8；六、生根培养：切取步骤五伸长的丛生芽，然后转接至生根培养基上进行培养，得到组培生根苗，所述的生根培养基是由0.1mg/L～2.0mg/L NAA、30g/L～35g/L蔗糖和6g/L～7g/L琼脂粉组成的的1/2MS培养基，pH值为5.5～5.8，培养条件：温度25±2℃，光照强度30μmol·m‑2·s‑1～40μmol·m‑2·s‑1，光照14h/d～16h/d；诱导培养28d～30d；七、炼苗移栽：将组培生根苗在炼苗室开盖锻炼2天～3天后，移栽至混合基质中，得到小叶章再生植株；所述混合基质是由草炭土、蛭石和珍珠岩按重量比3：(1～2)：(1～3)组成的混合物。