[发明专利]以菊芋为原料的产油微生物生产微生物油脂的方法

摘要

本发明一种以菊芋为原料的产油微生物培养方法，包括步骤：制备种子培养基、菌体增殖培养、制备产油培养基、菌体油脂积累培养、提取产油微生物油脂等。本发明采用菊粉为原料制备培养基，价格低廉，适于大规模工业应用；根据菊芋水解液的特点、通过不同的处理方式，调整营养元素的含量，开发出限磷/硫调控结合两阶段培养的产油微生物培养技术，显著提高菌体增殖速率及产油微生物的油脂积累速率，油脂产量明显提高；本发明方法的应用扩展了生物柴油的油脂原料来源，可显著缩短生产周期，降低生产成本，提高了生产效率。

主权项

一种以菊芋为原料的产油微生物生产微生物油脂的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、制备菊芋水解液：将菊粉与水按质量比1:1～10混合，采用3mol/L盐酸调节pH至1～4；饱和蒸汽下水解10～40min，调节pH至中性，得到菊芋水解液；S2、制备种子培养基：取步骤S1制得的菊芋水解液的二分之一，添加氮源至1～20g/L，添加磷酸二氢钾至1.0g/L，添加MgSO₄·7H₂O至0.5g/L，灭菌，得到微生物的种子培养基；S3、菌体增殖培养：以10％(V/V)接种量接入产油微生物种子液(OD_600nm＝1～10)于步骤S1制得的种子培养基中，在20～40℃、转速为40～800rpm条件下，通气培养12～96h，离心分离，收集菌体，即为增殖后的产油微生物菌体；S4、制备产油培养基：将步骤S1制得的菊芋水解液剩余的二分之一进行脱磷处理，得到碳元素与磷元素摩尔比率大于70的除磷产油培养基；或将步骤S1制得的菊芋水解液剩余的二分之一进行脱硫处理，得到碳元素与硫元素摩尔比率大于150的除硫产油培养基；S5、菌体油脂积累培养：将步骤S3制得的增殖后的产油微生物菌体接种于步骤S4制得的除磷产油培养基或除硫产油培养基中；在20～40℃、pH值为3.0～8.0、转速为40～800rpm条件下培养48～168h，收集菌体，即为含油的产油微生物菌体，于105℃烘干至恒重，得到产油微生物干菌体；S6、提取产油微生物油脂：提取步骤S5得到的产油微生物干菌体中的油脂，得到产油微生物油脂。