[发明专利]一种从牛蒡子中分离牛蒡子油、牛蒡苷、牛蒡苷元、牛蒡酚E和牛蒡酚H的方法

摘要

本发明提供一种从牛蒡子中分离牛蒡子油、牛蒡苷、牛蒡苷元、牛蒡酚E和牛蒡酚H的方法，所述方法先通过CO2超临界流体萃取对牛蒡子进行脱脂，分离得到牛蒡子油和脱脂牛蒡子粉，对脱脂牛蒡子粉进行水醇提取并浓缩得到提取浸膏，对提取浸膏进行CH2Cl2萃取并上硅胶柱色谱层析，采用二氯甲烷‑甲醇梯度洗脱，并经过薄层色谱分析、纯化得到牛蒡苷元、牛蒡酚E、牛蒡苷和牛蒡酚H。本发明采用连续式的一条路线即可完成多种产物的分离，充分利用了原料，节约了资源，脱脂过程不会污染环境，得到的牛蒡子油营养价值高，牛蒡苷元、牛蒡苷、牛蒡酚E和牛蒡酚H纯度高，可单独或与其他物质混合作为原料应用于药食领域。

主权项

一种从牛蒡子中分离牛蒡子油、牛蒡苷、牛蒡苷元、牛蒡酚E和牛蒡酚H的方法，其特征在于，包括如下步骤：1）将牛蒡子粉碎后进行CO2超临界萃取脱脂5~7小时，得到牛蒡子油和脱脂牛蒡子粉；CO2超临界萃取的工艺条件为，萃取压力30 MPa、萃取温度40℃、分离压力10 MPa、分离温度40℃、二氧化碳流量500 L/h；2）对步骤1）得到的脱脂牛蒡子粉回流提取3~4次，采用150~300目筛过滤每次提取的提取液，合并滤液并进行浓缩，得到提取浸膏；其中，提取液为质量浓度为50~95%的水醇溶液，每次提取时所述提取液的使用质量为所述脱脂牛蒡子粉质量的5~10倍，每次提取时间为0.5~2小时；3）采用CH2Cl2萃取步骤2）得到的提取浸膏2~3次，合并萃取液，得到待分离样品；其中，所述CH2Cl2与所述提取浸膏的体积质量比为2~3 mL:1 g；4）将步骤3）得到的待分离样品浓缩，加入拌样硅胶拌样，进行硅胶柱色谱层析，采用梯度洗脱模式，所述梯度洗脱使用的洗脱液依次为体积比100:0、100: 2、100: 5、100: 8、100: 10和0:100的二氯甲烷‑甲醇溶液，每个梯度洗脱5~8个保留体积，每1/3保留体积收集为一个馏分；其中，所述硅胶柱色谱层析中拌样硅胶与待分离样品的质量比为1~2:1，填料硅胶与拌样硅胶的质量比为5~15:1；5）对步骤4）收集得到的每一个馏分进行薄层色谱分析，用体积比为100:5的二氯甲烷‑甲醇展开剂检测牛蒡苷元、体积比为100:8的二氯甲烷‑甲醇展开剂检测牛蒡酚E、体积比为100:10的二氯甲烷‑甲醇展开剂检测牛蒡苷、体积比为100:15的二氯甲烷‑甲醇展开剂检测牛蒡酚H，合并薄层分析结果相似的馏分，分别得到牛蒡苷元馏分、牛蒡酚E馏分、牛蒡苷馏分和牛蒡酚H馏分；6）分别对步骤5）得到的牛蒡苷元馏分和牛蒡苷馏分进行浓缩干燥，得到牛蒡苷元纯品和牛蒡苷纯品； 7）用醇溶解步骤5）得到的牛蒡酚E馏分，并加入拌样硅胶拌样，采用中低压正相硅胶色谱进行梯度洗脱，所述梯度洗脱使用的洗脱液依次为体积比100:8、100:12和0:100的石油醚‑乙酸乙酯溶液，每个梯度洗脱5~8个保留体积，对每个梯度的洗脱液用体积比为100:8的二氯甲烷‑甲醇溶液作为展开剂进行薄层色谱分析，合并分析结果相似的馏分并浓缩，得到牛蒡酚E纯品；其中，所述拌样硅胶与牛蒡酚E馏分的质量比为1~2:1，所述中低压正相硅胶色谱中填料硅胶与拌样硅胶的质量比为6~10:1；8）用醇溶解步骤5）得到的牛蒡酚H馏分，并加入拌样硅胶拌样，采用中低压正相硅胶色谱进行梯度洗脱，所述梯度洗脱使用的洗脱液依次为体积比100:3、100:5和0:100的乙酸乙酯‑甲醇溶液，每个梯度洗脱5~8个保留体积，对每个梯度的洗脱液用体积比为100:15的二氯甲烷‑甲醇溶液作为展开剂进行薄层色谱分析，合并分析结果相似的馏分并浓缩，得到牛蒡酚H纯品；其中，所述拌样硅胶与牛蒡酚E馏分的质量比为1~2:1，所述中低压正相硅胶色谱中填料硅胶与拌样硅胶的质量比为10~20:1。