[发明专利]一种酶解-发酵偶联的制备水产蛋白活性肽方法

摘要

本发明公开了一种酶解-发酵偶联的制备水产蛋白活性肽方法，包括以下主要步骤：将新鲜的水产蛋白绞碎；绞碎后的水产蛋白加入到酶解罐中，并添加营养物和水混匀作为发酵培养基；酶解罐中接入能产蛋白酶的耐高温兼性厌氧菌甲基营养型芽孢杆菌（Bacillus methylotrophicus）HL-4同时进行酶解和发酵；发酵液先后经过滤、超滤和纳滤后得到浓缩液，浓缩液经冷冻干燥后得到活性肽成品。本发明技术可以在酶解罐中同时完成了酶解和发酵的过程，简化了设备和操作；并且作用条件温和，更多地保留了制备的功能肽和水产蛋白本身所含功能性成分的生物学活性，有着良好的应用前景。

主权项

一种酶解‑发酵偶联的制备水产蛋白活性肽方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：（1）将斜面保藏的能产蛋白酶的耐高温兼性厌氧菌甲基营养型芽孢杆菌（Bacillus methylotrophicus） HL‑4接入到灭菌后冷却的LB液体培养基中，于55 ℃、150r/min培养12h，制备成Bacillus methylotrophicus HL‑4种子液备用；（2）将新鲜的水产蛋白绞碎后备用；（3）将步骤（2）制得的绞碎的水产蛋白放入到酶解罐中，并向酶解罐中加入水和营养物，混匀后得到发酵培养基；（4）往步骤（3）获得的发酵培养上接入步骤（1）所制备的Bacillus methylotrophicus HL‑4种子液；（5）酶解‑发酵过程的控制：酶解罐温度为50℃～55℃，酶解罐的转速为50rpm～100rpm，时间为42h～48h；（6）成品处理：将步骤（5）得到的发酵液进行过滤去除沉淀得到上清液；上清液通过截留分子量为5000道尔顿的超滤膜的超滤去除大分子蛋白质而得到透过液；透过液然后通过截留分子量为200道尔顿的纳滤膜的纳滤去除氨基酸而得到浓缩液；浓缩液经过冷冻干燥而得到活性肽成品。