[发明专利]一种用于鉴定转基因甘蔗红糖的引物组合物、试剂盒及检测方法

摘要

本发明涉及一种鉴定转基因甘蔗红糖的引物组合物、试剂盒及检测方法，其引物组合物包括第一引物组和第二引物组，所述第一引物组为扩增甘蔗内源基因ShSAP1的引物对，所述第二引物组选自扩增甘蔗外源基因35S的引物对、扩增甘蔗外源基因tNOS的引物对、扩增甘蔗外源基因CP4‑EPSPS的引物对、扩增甘蔗外源基因Cry1Ab的引物对、扩增甘蔗外源基因Vip3Aa的引物对、扩增甘蔗外源基因Bar的引物对中的一种或多种。本发明的鉴定方法操作简单，成本低，能稳定的从甘蔗红糖中提取高质量的模板DNA用于荧光定量PCR检测，且准确性和灵敏度高。

主权项

1.一种用于鉴定转基因甘蔗红糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，从样品中提取DNA，每5g红糖按如下方式提取：称取红糖5g，置于50ml的离心管中，加入20ml的CTAB裂解液，65℃温浴溶解1小时，期间进行两到三次的漩涡震荡处理；冷却 后，加入20ml氯仿/异戊醇(24:1)，摇晃震荡均匀后，12000rpm离心10min，用5ml的移液枪头深入离心管底部，吸弃底层液相，再加入20ml氯仿/异戊醇(24:1)进行抽提，如此反复2‑3次；最后吸取上层水相至另一干净的离心管内，加入等体积预冷的异丙醇，‑20℃沉淀30‑60min，12000rpm离心10min，倒掉上清后，沉淀加20ml水再次溶解，加1/10体积的NaAc，再次加入等体积预冷的异丙醇，‑20℃沉淀30‑60min，沉淀再次用900ul的水进行溶解，并转移至2ml的离心管内，加1/10体积的NaAc及等体积预冷的异丙醇，‑20℃沉淀30‑60min，沉淀吹干后溶解于50‑100ul的水或TE中；步骤2，用引物组合物进行荧光定量PCR扩增，得到扩增产物；其中，所述引物组合物包括第一引物组和第二引物组，所述第一引物组为扩增甘蔗内源基因ShSAP1的引物对，所述第二引物组由扩增甘蔗外源基因35S的引物对、扩增甘蔗外源基因tNOS的引物对、扩增甘蔗外源基因CP4‑EPSPS的引物对、扩增甘蔗外源基因Cry1Ab的引物对、扩增甘蔗外源基因Vip3Aa的引物对和扩增甘蔗外源基因Bar的引物对组成，其中，扩增甘蔗内源基因ShSAP1的引物对的正向引物的序列如SEQ ID NO：1所示，反向引物的序列如SEQ ID NO：2所示；扩增甘蔗外源基因35S的引物对的正向引物的序列如SEQ ID NO：3所示，反向引物的序列如SEQ ID NO：4所示；扩增甘蔗外源基因tNOS的引物对的正向引物的序列如SEQ ID NO：5所示，反向引物的序列如SEQ ID NO：6所示；扩增甘蔗外源基因CP4‑EPSPS的引物对的正向引物的序列如SEQ ID NO：7所示，反向引物的序列如SEQ ID NO：8所示；扩增甘蔗外源基因Cry1Ab的引物对的正向引物的序列如SEQ ID NO：9所示，反向引物的序列如SEQ ID NO：10所示；扩增甘蔗外源基因Vip3Aa的引物对的正向引物的序列如SEQ ID NO：11所示，反向引物的序列如SEQ ID NO：12所示；扩增甘蔗外源基因Bar的引物对的正向引物的序列如SEQ ID NO：13所示，反向引物的序列如SEQ ID NO：14所示；步骤3，检测扩增产物，并作出判断。