[发明专利]超临界流体色谱分离纯化肠激酶工艺在审
| 申请号： | 201610134989.4 | 申请日： | 2016-03-10 |
| 公开（公告）号： | CN107177573A | 公开（公告）日： | 2017-09-19 |
| 发明（设计）人： | 费苹;陈银芳;费正明;陈明全 | 申请（专利权）人： | 如皋市永兴肠衣有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/64 | 分类号： | C12N9/64 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 226500 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及基因工程领域重组蛋白的一种超临界流体色谱分离纯化肠激酶工艺，其步骤为（1）在牛肠激酶催化亚基的基因EKL上构建突变体EKLM，突变体EKLM的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；（2）替换掉突变体EKLM中存在的大肠杆菌不利表达的密码子从而获得优化的基因序列EKLMO，EKLMO的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。利用本发明所述制备重组牛肠激酶催化亚基蛋白的方法，可以有效保持牛肠激酶催化亚基的活性，具有很高的蛋白得率，而且本发明所述的方法生产工艺简单，产品质量稳定。提纯后的蛋白可以用于生物工程或药物生产等多个目的，具有显著的应用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 临界 流体 色谱 分离 纯化 肠激酶 工艺 | ||
【主权项】：
一种超临界流体色谱分离纯化肠激酶工艺，其特征在于：工艺步骤为 ：⑴在牛肠激酶催化亚基的基因 EKL 上构建突变体 EKLM，突变体 EKLM 的核苷酸序列；⑵替换掉突变体 EKLM 中存在的大肠杆菌不利表达的密码子从而获得优化的基因序列，EKLMO，EKLMO 的核苷酸序列；⑶在 EKLMO 的 5` 末端加入牛肠激酶自身的酶切位点序列，在 EKLMO 的 3` 末端加入标 签序列，得到完整的表达基因片段；⑷将上述表达基因片段克隆进入载体，构建得到高效表达载体，将其转入大肠杆菌 BL21，用 IPTG 诱导重组基因的表达 ；⑸收集菌体，提纯目的蛋白。
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