[发明专利]一种检测动物血浆中氯唑沙宗的HPLC‑MS/MS方法

摘要

本发明公开了一种检测动物血浆中氯唑沙宗的HPLC‑MS/MS方法，包括如下步骤称取待测样品，加入格列吡嗪内标溶液及乙腈，涡旋，超声，离心，取上清液，过滤后取样进行HPLC‑MS/MS分析。另将氯唑沙宗及内标格列吡嗪用甲醇溶解，用乙腈定容，分别配制储备液，采用处理过的空白血浆配制系列标准工作溶液，经HPLC‑MS/MS分析，得到氯唑沙宗的工作曲线和相关系数；将样品测得的检验数据通过工作曲线和相关系数计算出样品的氯唑沙宗浓度。本发明方法灵敏度高，操作简单，重复性较好，准确度较高，适合于分析动物血浆中氯唑沙宗的量，克服了现有技术中的不足。

主权项

一种检测动物血浆中氯唑沙宗的HPLC‑MS/MS方法，其特征在于包括如下步骤：血浆来源，小鼠空腹12h后，按照0.5mg/kg体重腹腔注射氯唑沙宗溶液，氯唑沙宗溶液为氯唑沙宗溶于0.9％生理盐水后形成；注射后2，5，10，15，30,45，60，90，120，180，240min时分别采集血样，然后进行样品处理和分析；(1)将血浆摇匀后吸取125μL于尖底具塞离心管中，加入10μL 250ng/mL的格列吡嗪内标溶液及365μL乙腈，涡旋30s，超声10min，16000r/min离心10min，取上清液，用0.22μm有机相针式滤器过滤，取样品待测；(2)将氯唑沙宗及内标格列吡嗪用甲醇溶解，用乙腈定容，分别配制100μg/mL的储备液，–40℃保存；采用处理过的空白血浆配制系列标准工作溶液，氯唑沙宗浓度梯度为0.20，0.50，1.00，2.00，5.00，10.00，20.00，50.00和100.00ng/mL，内标格列吡嗪的浓度均为5ng/mL；(3)HPLC‑MS/MS分析条件为：色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB–C18，150mm×2.1mm，5μm；流动相及洗脱方式：30％30mmol/L乙酸铵溶液+70％乙腈等度洗脱；流速：0.5mL/min；进样量：2μL；柱温：40℃；运行时间：8min；离子源：电喷雾离子源；扫描模式：负离子扫描；监测方式：多反应监测(MRM)；电喷雾电压：‑4500V；离子源温度：600℃；雾化气(GS1，N2)：65psi；辅助加热气(GS2，N2)：60psi；气帘气(Curtain gas，CUR，N2)：35psi；碰撞气(Collision gas，CAD，N2)：7psi；驻留时间：100ms；入口电压：10V；出口电压：12V；氯唑沙宗及内标格列吡嗪MRM参数见表1：表1 目标物及内标的MRM参数(4)将步骤(2)所述的氯唑沙宗系列标准工作溶液按照由低浓度到高浓度的顺序进行HPLC‑MS/MS分析，并以氯唑沙宗与其内标的峰面积比对相应的氯唑沙宗浓度进行线性回归分析，得到氯唑沙宗的工作曲线和相关系数；(5)将步骤(2)所得样品进行HPLC‑MS/MS分析，获得的检验数据通过步骤(4)所得氯唑沙宗的工作曲线和相关系数计算出步骤(1)所用血浆中的氯唑沙宗浓度；所述方法对于动物血浆中氯唑沙宗的检测限和定量限分别为0.038和0.127ng/mL。