[发明专利]一种细菌及其在生产十六碳二元酸中的应用

摘要

本发明提供了一种新细菌，为Acinetobacter属，属于微生物技术领域，同时，提供了其在生产十六碳二元酸中的应用，本发明提供的细菌能够生产十六碳二元酸，采用本发明提供的细菌生产十六碳二元酸，避免了现有技术中使用热带念珠菌生产DC₁₆菌株的危害，本发明提供的新细菌发酵生产DC₁₆的产率也大于现有技术中其他生物法制备的产率。

主权项

1.保藏号CGMCCNo.11839的Acinetobacter属菌株在制备十六碳二元酸中的应用，具体步骤如下：（1）制备培养基发酵培养基II：正十六烷 1.5g/L，蛋白胨4.0g/L，(NH₄)₂SO₄ 0.15g/L ，KH₂PO₄ 0.8g/L，NaCl 0.1g/L，去离子水1000mL，调pH 为7.2，分装到500 mL三角瓶中，121℃ 20min 灭菌待用；液体筛选培养基：K₂HPO₄ 1.5g/L，MgSO₄ ·7H₂O 0.5g/L, NH₄NO₃ 1.5g/L, FeCl₃ 0.025g/L, 无水CaCl₂ 0.01g/L，正十六烷1.5 g/L，用2M的NaOH 调节pH 至 7.0，121 ℃ 20 min灭菌，待用；（2）发酵正十六烷发酵细菌的预培养过程：将菌株接种到液体筛选培养基中，28 ℃，150 rpm/min条件振荡培养3 d，得到预培养液；发酵过程：取预培养液20mL接种到3L发酵培养基II中，28 ℃，150 rpm/min振荡培养，每隔24 h用6 mol/L NaOH溶液调整发酵液pH至7.2，培养时间为20 d，发酵结束后取发酵液进行十六碳二元酸的提取及测定；（3）十六碳二元酸的提取将发酵液加热到85 ℃，边搅拌边用NaOH调整pH为11.0，趁热进行膜抽滤，所用滤膜为硝酸纤维素膜，孔径为0.22µm，收集抽滤液；将抽滤液在4 ℃条件下静置12 h，取抽滤液上部液体加入稀硫酸，调整pH为2.0，4 ℃条件下静置12 h，收集底部沉淀；取抽滤液下部沉淀加入去离子水溶解，用稀硫酸调整溶液pH至2.0，4 ℃条件下静置12 h，收集底部沉淀；合并两部分沉淀，低温真空干燥，即得总十六碳二元酸；（4）气质联用方法测定十六碳二元酸含量。