[发明专利]一种以睾丸支持细胞为滋养层进行体外授精的方法

摘要

本发明涉及一种以睾丸支持细胞为滋养层进行体外授精的方法，包括以下步骤：(1)将睾丸支持细胞的分离培养，制备支持细胞滋养层；(2)将精子导入盛有已平衡好的HTF获能液中孵育1h；(3)卵子的收集；(4)将洗涤过的卵子转入已平衡的有睾丸支持细胞单层的培养基；(5)将20ul孵育好的精子悬浮液加到含有卵子的培养液中；(6)将培养皿放回37℃、5％CO₂培养箱孵育，保持5-6h；(7)将有第二极体和原核的卵从培养基中捡选出来，转入培养基中进行培养。本发明的优点是授精率和发育率高。

主权项

一种以睾丸支持细胞为滋养层进行体外授精的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将睾丸支持细胞分离培养2天，细胞单层形成，在进行体外受精前12h弃去旧培养基，用PBS洗1次，加入含1％FBS、1％PS的a‑MEM培养基，将培养皿置于37℃、5％CO₂的培养箱中过夜培养平衡，同时将HTF精子获能液也放入37℃、5％CO₂的培养箱过夜平衡；(2)获取精子后，将精子导入盛有已平衡好的HTF获能液中，在37℃、5％CO2培养箱内孵育1h；(3)卵子的收集：收集出卵丘卵母细胞复合体；(4)用透明质酸酶消化卵子周围的卵丘细胞，洗涤3次后，将洗涤过的卵子转入已平衡的有睾丸支持细胞单层的培养基；(5)将20ul步骤(2)所孵育好的精子悬浮液加到含有卵子的培养液中，精子浓度为2‑4×10⁶个/ml；(6)将培养皿放回37℃、5％CO₂培养箱孵育，保持5‑6h；(7)将有第二极体和原核的卵从培养基中捡选出来，用培养基洗2次，然后转入培养基中进行培养。