[发明专利]一种提高植物对入侵的DNA 病毒的抵御能力的方法

摘要

本发明公开了一种提高植物对入侵的DNA病毒的抵御能力的方法。本发明提供了培育对DNA病毒的抵御能力提高的植物的方法，包括如下步骤：1)从待抵御的DNA病毒的基因组序列中选取符合5’‑N_X‑NGG‑3’或5’‑CCN‑N_X‑3’排列规则的序列作为靶序列；针对所述靶序列设计合成与之反向互补的DNA片段；2)将所述DNA片段构建到用于表达CRISPR/Cas9核酸酶的载体中，得到能转录向导RNA和表达Cas9蛋白的重组载体；所述向导RNA中的crRNA含有由所述DNA片段转录所得的RNA片段；3)将所述重组载体导入受体植物后从中获得对所述DNA病毒抵御能力提高的植物。本发明方法仅仅基于病毒的基因组序列，不需要了解病毒基因的具体功能，所以该方法可广泛应用于抵御序列已知的各种双链DNA病毒及以DNA双链为中间体的单链DNA病毒。

主权项

一种培育对DNA病毒的抵御能力提高的植物的方法，包括如下步骤：(1)从待抵御的DNA病毒的基因组序列中选取若干靶序列；针对各所述靶序列，分别设计合成与所述靶序列反向互补的DNA片段；所述靶序列为符合5’‑N_X‑NGG‑3’或5’‑CCN‑N_X‑3’序列排列规则的序列；N表示A、G、C和T中的任一种，14≤X≤30，且X为整数，N_X表示X个连续的脱氧核糖核苷酸；(2)将步骤(1)获得的若干个所述DNA片段分别构建到用于表达CRISPR/Cas9核酸酶的载体中，得到若干个重组载体；所述重组载体能转录向导RNA和表达Cas9蛋白；所述向导RNA为由crRNA和tracrRNA通过碱基配对结合而成的具有回文结构的RNA；所述crRNA含有由所述DNA片段转录所得的RNA片段；(3)将若干个所述重组载体分别导入受体植物，从导入所述重组载体的受体植物中获得对所述DNA病毒抵御能力提高的植物；所述DNA病毒为双链DNA病毒或以DNA双链为中间体的单链DNA病毒。