[发明专利]一种利用分子标记快速转育获得橙红色颖壳水稻育种材料及其转育方法

摘要

本发明公开了一种利用分子标记快速获得橙红色颖壳水稻育种材料，其转育方法，包括以下步骤：（1）材料准备；（2）杂交处理；（3）分子标记选择：选择综合性状优良的杂交后代，提取DNA，分子标记筛选，确定含有目标基因植株，进行回交，对回交后代进行分子标记筛选，重复回交，分子标记筛选4-5代；（4）选择含有目的基因的植株进行自交；（5）在自交后代中选择获得含有橙红色颖壳性状的水稻育种材料，进行水稻杂交制种，通过后代种子是否含有橙红色颖壳性状来判断杂交种的真实性和纯度。本发明可操作性高，实用性强，可显著缩短育种材料育成时间，简单高效区别真实杂交种及其杂交种纯度，大大节省育种和制种的人力、财力投入。

主权项

一种利用分子标记快速获得橙红色颖壳水稻育种材料的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）材料准备：选取待转育成橙红色颖壳性状的水稻材料为母本，具有橙红色颖壳性状的水稻材料为父本，分别播种育苗；（2）杂交处理：选取即将开花的母本，去雄套袋，待雌蕊成熟之后，取父本花粉，授予已去雄的母本雌蕊柱头上后套袋；（3）分子标记选择：选取饱满的杂交种子，消毒后用无菌水冲洗干净，催芽培养，然后取其叶片提取DNA，以橙红色颖壳性状基因分子标记进行PCR扩增和凝胶电泳检测，选择含有橙红色颖壳性状基因，且标记呈杂合状态的植株进行培育，在后代中选择性状偏向母本的材料重复（1）、（2）、（3）步骤4‑5次；其中所述分子标记筛选的具体步骤为：1）PCR扩增体系：反应总体系为20µL，分别含有100ng水稻基因组DNA，1×buffer，1.5 mM MgCl₂，200 µM dNTP，0.25 µM 引物，0.5U Taq 酶；引物为：S1：F(5'‑3') CCCTCCGTCTCAACACTCTG；R(5'‑3') GCAATCTGCTTGTACTTCTC；S2：F(5'‑3') TATACCAAAACTAGGTTAAAAC；R(5'‑3') GCACTCCGAACTCTGAAA；2）PCR扩增；3）电泳检测：2.5%琼脂糖凝胶电泳或6%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳；（4）幼苗培养：将步骤（3）中选择的种子催芽、育苗然后套袋自交，自交后的种子继续催芽育苗后，取叶片提取DNA，以橙红色颖壳性状基因分子标记进行筛选，选择含有纯合橙红色颖壳性状基因，且标记呈纯合状态的植株，催芽、育苗培育；（5）选择橙红色颖壳水稻育种材料：待步骤（4）的幼苗抽穗后，持续观察颖壳变化，并与原始母本材料对比，选择具有橙红色颖壳性状的植株。