[发明专利]一种银翘散UPLC指纹图谱的建立方法

摘要

本发明公开了一种银翘散UPLC指纹图谱的建立方法。该方法可快速、准确地鉴别产品的真伪优劣，具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好等优点；用该方法还能较为全面地反映银翘散中所含化学成分的种类与数量，进而对其质量进行整体描述和评价，可将银翘散质量与其药效真正结合起来，有助于阐明其作用机理为本银翘散的技术提升与深度开发提供了依据。且用该方法检测到的银翘散指纹图谱化学成分相对较多、各特征峰高度比例适中，基线较平稳，分离度、峰形和柱效好。

主权项

1.一种银翘散UPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述银翘散按照重量组份计算，主要由金银花100份、连翘100份、桔梗60份、薄荷60份、淡豆鼓50份、淡竹叶40份、牛蒡子60份、荆芥40份、芦根100份和甘草40份按照下述方法制备而成：根据配方称取各药物，粉碎成细粉，过筛，混匀，即得；所述UPLC指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：（1）混合对照品溶液的制备：称取绿原酸、连翘苷、甘草苷、牛蒡苷、橙皮苷置于25mL量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成绿原酸10‑18μg/ml、连翘苷5‑15μg/ml、甘草苷8‑18μg/ml、牛蒡苷15‑25μg/ml、橙皮苷6‑18μg/ml的混合对照品溶液；（2）供试品溶液的制备：精密称取银翘散样品，加入浓度为75‑85%的甲醇，称定质量，回流提取,放冷，再称定质量，用浓度为75‑85%的甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤，取续滤液，过0.22μm微孔滤膜，即得；（3）指纹图谱的制作：色谱条件：色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18 ，2.1mm×100mm，1.7μm；流动相：A相为：0.2%磷酸水溶液，B相为：乙腈：甲醇=1:1，梯度洗脱，洗脱程序为：0～1min，7%～8%的B相；1～5.56min，8%～12%的B相；5.56～6.95min，12%～17%的B相；6.95～12.5min，17%～25%的B相；12.5～19.05min，25%～31%的B相；19.05～25min，31%～55%的B相；流速0.3ml/min，检测波长200‑260nm，柱温40℃，进样量1μL；记录谱图得到银翘散的UPLC指纹图谱；（4）标准指纹谱图的确认：按照上述提供的方法，对多批次银翘散建立了UPLC指纹图谱，通过分析比较确定了28个共有峰，这些共有峰构成了银翘散的指纹特征，作为银翘散的标准指纹图谱；所述混合对照品溶液这样制备：称取绿原酸0.37mg、连翘苷0.29mg、甘草苷0.34mg、牛蒡苷0.48mg、橙皮苷0.32mg置于25mL量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得绿原酸14.8μg/ml、连翘苷11.6μg/ml、甘草苷13.6μg/ml、牛蒡苷19.2μg/ml、橙皮苷12.8μg/ml的混合对照品溶液。