[发明专利]提高猴头菌发酵多糖的方法

摘要

本发明涉及遗传育种及生物活性物质生产技术领域的方法，公开了一种提高猴头菌发酵多糖的方法，包括以下步骤：(1)猴头菌原生质体制备；(2)辐照诱变虫草原生质体、原生质体再生；(3)挑选菌落，接种PDA培养基；(4)接种液体发酵培养基，该培养基由酵母膏、蛋白胨、葡萄糖、K₂HPO₄及MgSO₄等营养物质组成。(5)发酵过程中添加吐温80和丙三醇；(6)猴头菌胞外多糖和胞内多糖的制备。该方法利用诱变技术获得菌丝生长速度快、生物量高的猴头菌株，通过在发酵过程中添加吐温80和丙三醇，来提高多糖的产量，通过膜分离技术来制备胞外多糖，通过超声的方法来制备胞内多糖。此方法获得多糖产量高，操作简单。

主权项

1.提高猴头菌发酵多糖的方法，其特征在于：包括以下步骤，A.菌种活化及接种：将猴头菌菌种接种在PDA斜面培养基上，在25℃恒温培养7天后，接种在PDA液体培养基中，25℃振荡培养7天，得到液体发酵菌丝体；B.菌丝体的制备：100ml PDA液体培养基中得到的液体发酵菌丝体磨成泥状，收集菌丝，分别用灭菌水和0.6M硫酸镁等渗缓冲液冲洗；取0.5g菌丝加入1g酶液，30℃静置酶解3h，滤液离心，上清液离心得原生质体溶液；C.吸取0.6ml原生质体溶液装于1ml离心管中，在冰浴条件下进行辐照诱变处理，处理剂量为100～150Gy，将诱变后的菌液涂布于平板上，置于25℃恒温培养箱进行培养；待再生培养基上长出菌落后，挑选单菌落，接种至PDA固体斜面培养基上，置于25℃恒温培养7d，得到诱变菌株菌块；D.接种诱变菌株菌块于液体发酵培养基上，25～27℃摇床培养8天，液体发酵培养基组分及配比为10～20g/L的葡萄糖，1～2g/L的酵母膏，1～2g/L的蛋白胨，0.3～0.6g/L的MgSO₄·7H₂O，0.5～0.8g/L的K₂HPO₄；在液体发酵第4天时，向发酵液中添加灭过菌的吐温80和丙三醇，继续发酵4天，吐温80占发酵液量的0.2～0.3％，丙三醇占发酵液量的0.01～0.03％；E.发酵结束后，过滤发酵液，获得滤液与菌丝体，滤液离心，上清液直接用截留量>1万的超滤膜进行处理得浓缩液，浓缩液经冷冻干燥后得猴头菌胞外多糖；F.步骤E得到的菌丝体用胶体磨研磨，匀浆后加水，水的质量为菌丝体质量的5倍，混匀，超声提取30～60分钟，将温度升至90～100℃再浸提60分钟，过滤收集滤液，用0.2MPa反渗透膜浓缩至滤液浑浊时，再加入3倍体积的95％的乙醇，离心、干燥、粉碎后，得猴头菌胞内多糖。