[发明专利]一种间接制备D-异抗坏血酸钠的方法

摘要

本发明公开了一种间接制备D‑异抗坏血酸钠的方法，属于生物化学分离合成技术领域。本发明以粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）SDSPY‑136菌株的发酵液为原料，经发酵液预处理、2‑酮基‑D‑葡萄糖酸甲酯化反应、转换反应得D‑异抗坏血酸粗钠盐；再经精制纯化得D‑异抗坏血酸钠产品。本发明以粘质沙雷氏菌为生产菌种发酵得到2‑酮基‑D‑葡萄糖酸钙，结合多种除杂方式，将处理液转化合成D‑异抗坏血酸钠，得到的发酵液2‑酮基‑D‑葡萄糖酸产量高、转化率高，D‑异抗坏血酸钠粗品纯度高，易于精制，总收率得到提高，具有良好的推广应用前景。

主权项

1.一种间接制备D-异抗坏血酸钠的制备方法，其特征在于：以粘质沙雷氏菌（Serratiamarcescens）SDSPY-136菌株的发酵液为原料，经发酵液预处理、2-酮基-D-葡萄糖酸甲酯化反应、转换反应得D-异抗坏血酸粗钠盐；再经精制纯化得D-异抗坏血酸钠产品；所述粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）SDSPY-136菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No：10548，其保藏时间为：2015年2月9日；/n所述间接制备D-异抗坏血酸钠的制备方法，具体步骤为：/n1）菌种发酵/n按照8-12%的接种量将所述粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）SDSPY-136菌株的种子液接种到发酵培养基中，在29-31℃、400-600r/min条件下发酵培养30-40h，得到2-酮基-D-葡萄糖酸发酵液；/n步骤1）中获得种子液所用的种子培养基组成为蛋白胨5g/L、氯化钠5 g/L、牛肉膏3 g/L，pH值为7.0；所述发酵培养基组成为葡萄糖180 g/L、玉米浆9.01 g/L、硫酸二氢钾1 g/L、硫酸镁0.4 g/L、氯化锰0.037 g/L、硫酸亚铁0.036 g/L、碳酸钙65 g/L；/n2）发酵液预处理/n所述2-酮基-D-葡萄糖酸发酵液离心后所得清夜中加入浓硫酸，然后在50-95℃的水浴条件下，向酸化后的清夜中加入活性炭，搅拌脱色；脱色后滤除活性炭，所得滤液过阳离子交换树脂柱，由阳离子交换树脂柱除杂后收集的处理液减压蒸馏，得固形物含量为70-90%得2-酮基-D-葡萄糖酸浓缩液；所述阳离子交换树脂柱为732#阳离子交换树脂柱，所述阳离子交换树脂柱高径比为9:1-10:1，流速每小时1-1.1倍柱体积；/n3）甲酯化反应/n向所述2-酮基-D-葡萄糖酸浓缩液中加入甲醇，并以硫酸作为催化剂，于60-100℃反应5-10h，反应完毕，浓缩、4℃下结晶，抽滤并烘干得2-酮基-D-葡萄糖酸甲酯盐；/n4）转化反应/n将所述2-酮基-D-葡萄糖酸甲酯盐加入甲醇中溶解，然后加入甲醇-氢氧化钠混合液，在55-70℃下，反应13-20min，然后于4℃下放置结晶，抽滤得D-异抗坏血酸粗钠盐；/n5）D-异抗坏血酸钠的精制/n所得D-异抗坏血酸粗钠盐溶于水中，加入活性炭和草酸，加热至50-70℃，保温搅拌3-8min，然后趁热抽滤得滤液；所得滤液冷却、结晶、抽滤并用90-100%乙醇洗涤后干燥得D-异抗坏血酸钠产品。/n