[发明专利]一种香鳞毛蕨愈伤组织的诱导方法及应用

摘要

本发明公开了一种香鳞毛蕨愈伤组织的诱导方法及应用，属于生物技术领域。本发明所提供的方法为将香鳞毛蕨孢子制备成无菌的孢子悬浮液后接种到改良的Knop′s培养基上，先黑暗处理萌发后进行培养，获得孢子体，将获得的香鳞毛蕨孢子体的茎尖和幼嫩叶片基部作为外植体，接入添加6‑BA和NAA的培养基中进行培养，形成绿色小球体；将绿色小球体或孢子体茎尖接种于含有6‑BA和2,4‑D的培养基中进行增殖分化形成愈伤组织。本发明方法为建立香鳞毛蕨的快繁体系奠定了理论及实践依据，从而保护了香鳞毛蕨的野生资源，添补了香鳞毛蕨组织培养研究中通过茎尖和幼嫩叶片基部进行愈伤组织诱导的空白。

主权项

一种香鳞毛蕨愈伤组织的诱导方法，其特征在于，步骤如下：1)孢子体的诱导：将香鳞毛蕨的成熟孢子制备成孢子悬浮液后，将孢子悬浮液接种于改良的Knop′s培养基中先黑暗处理同步萌发后进行培养，待长至原叶体阶段将其接种于1/4MS+蔗糖的固体培养基中进行培养，待原叶体长出性器官后将其接种于1/2MS+蔗糖的固体培养基中进行培养，获得孢子体；所述改良的Knop′s培养基，含有NaH2PO4 0.25g，KNO3 0.25g，MgSO4 0.25g，Ca(NO3)2 1.0g和蒸馏水1000mL；2)绿色小球体的诱导：将步骤1)获得的香鳞毛蕨孢子体的茎尖作为外植体，接入1/2MS+6‑BA+NAA+蔗糖的固体培养基中进行诱导培养，获得香鳞毛蕨绿色小球体；所述6‑BA，浓度为0.5mg/L‑2.0mg/L；所述NAA，浓度为0.5mg/L‑5.0mg/L；3)愈伤组织的诱导和增殖：将步骤2)获得的香鳞毛蕨绿色小球体或步骤1)获得的孢子体的茎尖接入1/2MS+6‑BA+2,4‑D+蔗糖的固体培养基中培养，形成愈伤组织后加入到1/2MS+蔗糖的固体培养基进行分化培养，获得香鳞毛蕨愈伤组织；所述6‑BA，浓度为0.5mg/L‑2.0mg/L；所述2,4‑D，浓度为0.5mg/L‑1.5mg/L。