[发明专利]检测体外精子获能液中的唾液酸酶的试剂盒的使用方法

摘要

本发明提供了检测体外精子获能液中的唾液酸酶的试剂盒的使用方法。具体步骤如下：A、收集新鲜液化精液标本，用磷酸缓冲液或者BWW培养液洗涤精子，充分除去残留的精浆成分，再离心分离出精子；B、向A步骤分离出的精子中加入BWW培养液，采用上游法，收获上游精子，计数精子数量，用体外获能液在5%的CO2细胞培养箱中孵育精子3~4 h；离心分离，收取的上清液再次离心分离，收取上清液作为待测样本；C、测定精子获能液中唾液酸酶的活性，最后得出唾液酸酶活性/精子数目的值即可。通过精子体外获能后获能液中唾液酸酶活性的检测，为临床原因不明的男性不育患者提供诊断依据及临床咨询。

主权项

1.检测体外精子获能液中的唾液酸酶的试剂盒的使用方法，其特征在于：试剂盒由磷酸缓冲液或者BWW培养液、BWW培养液、体外获能液、荧光试剂、唾液酸酶标准原液和检测缓冲液组成；所述的体外获能液为含HSA 5mg/ml的HTF；所述的检测缓冲液为含0.05 mmol/l 乙酸钠和0.25μg/μl牛血清白蛋白的磷酸缓冲液；所述的唾液酸酶标准原液为产气荚膜梭菌唾液酸酶，浓度为5U/ml；所述的荧光试剂是2′‑4‑甲基伞形酮基‑α‑D‑N‑乙酰神经氨酸钠；试剂盒的使用方法具体步骤如下：A、精子的洗涤收集新鲜液化精液标本，用磷酸缓冲液或者BWW培养液洗涤精子，充分除去残留的精浆成分，再离心分离出精子；B、精子的体外获能向A步骤分离出的精子中加入BWW培养液，采用上游法，在5%的CO₂细胞培养箱中培养，收获上游精子，计数精子数量，用体外获能液在5%的CO₂细胞培养箱中孵育精子3~4 h；离心分离，收取的上清液再次离心分离，收取上清液作为待测样本；C、精子获能液中唾液酸酶活性的测定（1）用检测缓冲液将唾液酸酶标准原液按5/2.5/1.25/0.625/0.312mU/ml的浓度梯度将其稀释为唾液酸酶标准溶液，向检测板内依次加入各唾液酸酶标准溶液和待测样本；（2）用检测缓冲液稀释荧光试剂，将其加入上述各唾液酸酶标准溶液和待测样本的孔内，再将检测板置于37℃，避光孵育1‑2小时后，用酶标仪读取各孔荧光强度，根据唾液酸酶活性标准曲线计算出待测样本的唾液酸酶活性，最后得出唾液酸酶活性/精子数目的值即可。