[发明专利]透明质酸酶的检测方法

摘要

本发明公开了一种透明质酸酶的检测方法，包括：1)Fe₃O₄纳米球的制备；2)Fe₃O₄@SiO₂纳米球的制备；3)Fe₃O₄@SiO₂@NH₂纳米球的制备；4)L‑半胱氨酸修饰的CdTe@CdS核壳结构的量子点的制备；5)HA‑QDs的制备；6)将Fe₃O₄@SiO₂@NH₂纳米球加入至HA‑QDs中以得到HA‑QDs‑Fe₃O₄复合结构，接着向多组复合结构中分别加入同体积、不同浓度的HAase溶液进行荧光反应，然后检测荧光强度并绘制工作曲线；7)将纯化后的正常人体血清加入至复合结构中进行荧光反应，然后检测荧光强度并根据工作曲线计算血清中HAase的浓度。该方法对于透明质酸酶的检测具有优异的灵敏度同时能够避免背景的干扰。

主权项

1.一种透明质酸酶的检测方法，其特征在于，包括：1）在保护气的存在下，将可溶性铁盐、乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮和醋酸钠进行接触反应，然后进行水热反应、磁性分离以制得Fe₃O₄纳米球；2）将所述Fe₃O₄纳米球分散于乙醇和水的混合体系中，接着加入氨水和正硅酸乙酯的乙醇溶液进行包硅、磁性分离以制得Fe₃O₄@SiO₂纳米球；3）将所述Fe₃O₄@SiO₂纳米球分散于乙醇中，接着加入氨水和3‑氨丙基三乙氧基硅烷进行氨基修饰、磁性分离以制得Fe₃O₄@SiO₂@NH₂纳米球；4）在保护气的存在下，将可溶性镉盐、L‑半胱氨酸溶于水中，接着加入碱调节pH，然后依次加入碲氢化钠、硫代乙酰胺进行回流反应、离心纯化以制得L‑半胱氨酸修饰的CdTe@CdS核壳结构的量子点；5）将透明质酸（HA）溶于PBS缓冲溶液中，接着加入1‑乙基‑3‑（3‑二甲基氨基丙基）碳化二亚胺（EDC）、N‑羟基丁二酰亚胺（NHS）和L‑半胱氨酸修饰的CdTe@CdS核壳结构的量子点进行接触反应，分离纯化以制得HA‑QDs；6）在EDC和NHS的存在下，将所述Fe₃O₄@SiO₂@NH₂纳米球加入至所述HA‑QDs中以得到HA‑QDs‑Fe₃O₄复合结构，接着向多组所述复合结构中分别加入同体积、不同浓度的透明质酸酶（HAase）溶液进行荧光反应，然后检测荧光强度并绘制工作曲线；7）将纯化后的人体血清溶液加入至所述复合结构中进行荧光反应，然后检测荧光强度并根据所述工作曲线计算所述人体血清中HAase的浓度；其中，在步骤5）中，相对于100mg的所述HA，所述EDC的用量为150‑250mg，所述NHS的用量为25‑35mg，所述L‑半胱氨酸修饰的CdTe@CdS核壳结构的量子点的用量为4‑6mL，所述PBS缓冲溶液的用量为80‑120mL并且所述PBS缓冲溶液的pH为6.5‑6.9；在步骤6）中，相对于0.01g的所述Fe₃O₄@SiO₂@NH₂纳米球，所述HA‑QDs的用量为0.02‑0.04g，所述HAase溶液的用量为0.5‑1.5mL且所述HAase溶液的浓度为0.01ng/mL‑0.1mg/mL，所述EDC的用量为30‑50mg，所述NHS的用量为10‑20mg。