[发明专利]一种检测活细胞内RhoGDIα蛋白活性的生物探针

摘要

本发明属于细胞生物学及分子生物学技术领域，涉及一种根据FRET基本原理设计制备的、可检测活细胞内RhoGDIα蛋白活性的生物探针。该探针为融合的蛋白质结构，包括FRET荧光蛋白对ECFP与Ypet，RhoGDIα全长序列，RhoGDIα的底物结构域switch II及中间的linker序列五个部分。本发明的融合质粒转入活细胞后，可由细胞自行表达出探针的融合蛋白结构，从而在细胞内发挥探针功能，具有特异性高、成本低、对细胞无副作用等特点。

主权项

1.一种检测活细胞内RhoGDIα蛋白活性的生物探针，其特征在于，该生物探针为融合的蛋白质结构，包括FRET荧光蛋白对ECFP(1‑1)与Ypet(1‑5)，RhoGDIα全长序列(1‑4)，RhoGDIα的底物结构域switch II(1‑2)及linker序列(1‑3)五个部分；FRET荧光蛋白对ECFP(1‑1)、RhoGDIα的底物结构域switch II(1‑2)、linker序列(1‑3)、RhoGDIα全长序列(1‑4)和Ypet(1‑5)依次连接；其中，RhoGDIα全长序列的氨基酸序列如下：MAEQEPTAEQLAQIAAENEEDEHSVNYKPPAQKSIQEIQELDKDDESLRKYKEALLGRVAVSADPNVPNVIVTRLTLVCSTAPGPLELDLTGDLESFKKQSFVLKEGVEYRIKISFRVNREIVSGMKYIQHTYRKGVKIDKTDYMVGSYGPRAEEYEFLTPMEEAPKGMLARGSYNIKSRFTDDDKTDHLSWEWNLTIKKEWKD其对应的DNA序列为：ATGGCAGAACAGGAACCCACTGCTGAGCAGCTCGCTCAGATAGCTGCAGAGAATGAGGAAGACGAGCACTCTGTGAACTACAAGCCTCCAGCCCAGAAGAGCATCCAGGAGATCCAGGAACTGGACAAGGATGATGAAAGCCTTCGAAAGTACAAGGAGGCCCTGCTGGGCCGAGTAGCTGTCTCTGCAGACCCCAATGTCCCCAACGTCATTGTGACCCGCTTGACCTTGGTGTGCAGCACTGCCCCAGGCCCTCTGGAACTGGACCTGACAGGTGATCTGGAGAGCTTCAAGAAACAGTCATTTGTGTTGAAGGAAGGTGTGGAGTACCGGATAAAAATCTCTTTCCGGGTGAACAGAGAGATCGTGTCAGGCATGAAGTACATCCAGCACACATACAGGAAAGGGGTCAAAATTGACAAGACTGACTACATGGTCGGGAGCTATGGGCCAAGGGCTGAGGAGTATGAGTTCCTGACACCCATGGAAGAGGCCCCCAAAGGCATGCTTGCTCGGGGCAGTTACAACATCAAGTCCCGCTTCACAGATGATGACAAAACTGACCACCTGTCCTGGGAGTGGAATCTCACCATCAAAAAGGAATGGAAGGACTGA；RhoGDIα的底物结构域switch II的氨基酸序列全长：DTAGQEDYDRLRPLS对应的DNA序列为：GATACTGCAGGGCAAGAGGATTATGACAGACTACGACCGTTATCC；Linker氨基酸序列为：GGSGGT对应的DNA序列为：GGTGGCTCTGGCGGTACT。