[发明专利]一种用SPE‑HPLC测定枳实或枳壳中酚性化合物的方法

摘要

本发明涉及一种用SPE‑HPLC测定枳实或枳壳中酚性化合物的方法。其具体步骤包括取枳实或枳壳粉末，准确称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇，超声提取，放冷，摇匀，滤过，精密量取滤液减压回收至干，用水溶解，流过预先以甲醇和水平衡过的固相萃取小柱，然后依次用甲醇淋洗，用纯甲醇洗脱，收集纯甲醇洗脱部分定容，微孔滤膜滤过，即得测试液；酚性化合物的测定。与现有技术相比，本发明采用SPE对样品进行了前处理，减少了杂质成分对测定的影响，而固相萃取具有操作简便、富集率高、消耗溶剂少、成本低、集提取与分离于一体等优点。此外，本法建立的色谱条件对各待检酚性化合物均有较好的分离度，且分析条件适宜。

主权项

一种用SPE‑HPLC测定枳实或枳壳中酚性化合物的方法，其特征在于，所述方法具体步骤包括：A、酚性化合物的富集：取过60目筛的枳实或枳壳粉末0.4 g，准确称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇50 mL，超声提取30 min，放冷，摇匀，滤过，精密量取滤液25 mL减压回收至干，用10 mL 水溶解，以1 mL/min的流速过预先以2 mL甲醇和5 mL水平衡过的固相萃取小柱，然后依次用2 mL 30%甲醇淋洗，用10 mL纯甲醇洗脱，收集纯甲醇洗脱部分定容至10 mL，0.22 μm微孔滤膜滤过，即得供试液；B、酚性化合物的测定：1）色谱条件：Agilent Poroshel 120 SB‑C18色谱柱，4.6 mm×100 mm，2.7 μm；流动相A为甲醇，B为0. 1%甲酸水溶液，采用梯度洗脱程序：0~4 min，30%A；4~23min，30%~33%A； 23~28 min，33%~44%A；28~40 min，44%A；40~44 min，44%~63%A；44~48 min，63%~65%A；48~50 min，65%~73%A；50~56 min，73%~96%A；柱温为30 ℃，流速0.6 mL·min‑1，检测波长：283 nm，318 nm，338 nm；2）对照品制备：取各种对照品，精密称定，加甲醇分别制成含橙皮苷0.136 mg·mL‑1、圣草次苷0.177 mg·mL‑11、芸香柚皮苷0.508 mg·mL‑1、柚皮苷0.506 mg·mL‑1、新橙皮苷0.260 mg·mL‑1、柚皮素0.204 mg·mL‑1、橙皮素0.316 mg·mL‑1、川陈皮素0.154 mg·mL‑1、5‑去甲川陈皮素0.150 mg·mL‑1、甜橙黄酮0.242 mg·mL‑1、橘皮素0.388 mg·mL‑1、芹菜苷0.246 mg·mL‑1、野漆树苷0.405 mg·mL‑1、山奈苷0.186 mg·mL‑1、芹菜素0.115 mg·mL‑1、香叶木素0.326 mg·mL‑1、7‑羟基香豆素 0.146 mg·mL‑1、佛手柑内酯0.169 mg·mL‑1、佛手柑素0.135 mg·mL‑1、橙皮油素0.148 mg·mL‑1的溶液，作为对照品储备液；3）含量测定：取供试液按上述色谱条件进行测定，并依据对照品对各对应的峰进行归属及含量计算。