[发明专利]一种抗禽传染性支气管炎病毒的植物提取物

摘要

一种抗禽传染性支气管炎病毒的植物提取物，包括如下步骤：S1、重组病毒的获得；S2、对指示病毒的检测；S3、半夏乙醇提取物的制备；S4、细胞无毒浓度的确定；S5、病毒感染；S6、酶活力的测定与病毒效力的评价。其优点是：通过替换IBV基因组上的3ab片段，以获得能够融合表达荧光素酶的指示病毒，侵染细胞，在病毒侵染细胞的前后过程中，加入半夏乙醇提取物，从而确定加入的半夏乙醇提取物对禽类IBV有抑制作用。

主权项

1.一种植物提取物在制备抗禽传染性支气管炎病毒药品中的应用，其特征在于：包括如下步骤：S1、重组病毒的获得：在禽传染性支气管炎病毒基因组上，通过替换禽传染性支气管炎病毒基因组的3ab片段，以获得能够融合表达荧光素酶的重组病毒IBV‑3ab‑luc,用该重组病毒IBV‑3ab‑luc作为指示病毒；S2、对指示病毒的检测：用指示病毒感染细胞，病毒复制一次，表达的荧光素酶的量也相应增加一次，感染后取样，测定荧光素酶的活力，以确定该指示病毒具有与IBV相同的感染力；S3、半夏乙醇提取物的制备：在半夏生长旺盛期，采集半夏茎叶洗净晾干后，切碎称重，用80％乙醇做溶剂浸泡切碎后的半夏茎叶，7d后，再过滤备用；S4、细胞无毒浓度的确定：用乙醇做溶剂，等倍稀释步骤S3中获得的半夏乙醇提取物备用；将备用的不同浓度的半夏乙醇提取物分别加入细胞培养板中后观察细胞生长情况，细胞变形脱落死亡视为该浓度的半夏乙醇提取物对细胞有害，据此选取对细胞无毒影响的半夏乙醇提取物最高浓度进行后续实验；S5、病毒感染：在细胞培养板中，培养细胞，待细胞的覆盖度达到85％以上时，选取步骤S4获得的浓度为0.2134g/mL的半夏乙醇提取物加入细胞培养液中，24h后，采用步骤S1制备的重组病毒IBV‑3ab‑luc感染；S6、酶活力的测定与病毒效力的评价：感染24h后，进行荧光素酶活力的检测，明确抗病毒的效力，同时半夏乙醇提取物对重组病毒IBV‑3ab‑luc抑制效果明显。