[发明专利]一种农杆菌介导的粳稻快速遗传转化方法

摘要

本发明提供一种农杆菌介导的粳稻快速遗传转化方法，包括如下步骤：诱导、侵染、共培养、筛选、分化、生根。本发明整个转化流程耗时约70d，相比常规转化缩短了3个多月，应用该转化方法得到的愈伤诱导率高于85％，平均抗性愈伤率69.71％，平均分化率84.58％，平均转化率约58％。总的来说，该转基因方法不仅可以保证转基因效率，而且可操作性强，适于大批量粳稻转基因实验，为水稻基础研究节约了大量时间，同时降低了实验过程中的人力、物力和财力耗费。

主权项

一种农杆菌介导的粳稻快速遗传转化方法，其特征在于，包括如下步骤：1)诱导：水稻种子去壳消毒后，将成熟胚接种于诱导培养基中，诱导胚性愈伤组织；2)侵染：将步骤1)所得愈伤组织与胚乳、芽分离，接种于农杆菌悬浮液中侵染，之后晾干待用；3)共培养：将晾干的愈伤组织转到共培养基中，培养至愈伤组织表面出现菌体；4)筛选：将共培养后的愈伤组织清洗后接种到筛选培养基中进行抗性筛选，获得抗性愈伤组织；5)分化：将获得的抗性愈伤组织接种到分化培养基上培养至分化出幼苗；6)生根：将幼苗接种到生根培养基上生根，并进行PCR检测，选择检测为阳性的植株作为转化得到的粳稻植株；所涉培养基的具体配方如下：诱导培养基为NLD培养基，其为以NL培养基为基本培养基，所含2,4‑二氯苯氧乙酸浓度为2‑3mg/L、水解酪蛋白浓度为0.3‑0.5g/L、脯氨酸浓度为1‑2g/L、蔗糖浓度为30g/L、植物凝胶浓度为3g/L，pH值为5.8的培养基；共培养基为NL‑AS培养基，其为以NL培养基为基本培养基，所含2,4‑二氯苯氧乙酸浓度为2‑3mg/L、水解酪蛋白浓度为0.3‑0.5g/L、蔗糖浓度为30g/L、葡萄糖浓度为10g/L、乙酰丁香酮浓度为100‑200μM，pH值为5.2的培养基；筛选培养基为NLS培养基，其为以NL培养基为基本培养基，所含2,4‑二氯苯氧乙酸浓度为2‑3mg/L、水解酪蛋白浓度为0.6‑1g/L、脯氨酸浓度为0.5‑1.5g/L、蔗糖浓度为30g/L、植物凝胶浓度为3g/L、头孢浓度为500mg/L、潮霉素浓度为50mg/L，pH值为5.8的培养基；分化培养基为MSRe培养基，其为以MS培养基为基本培养基，所含激动素浓度为1‑2mg/L、α‑萘乙酸浓度为0.5‑2mg/L、山梨醇浓度为20‑40g/L、蔗糖浓度为30g/L、植物凝胶浓度为3g/L，pH值为5.9的培养基；生根培养基为以1/2MS培养基为基本培养基，所含蔗糖浓度为20g/L、吲哚丁酸浓度为0.5mg/L、植物凝胶浓度为3g/L，pH值为5.8的培养基；所述NL培养基为有利于粳稻生长的基本培养基，其为以N₆培养基的大量元素、N₆培养基的微量元素、L₃培养基的有机成分加上铁盐组成的基本培养基。