[发明专利]从漆树木粉中提取具有抑制酪氨酸酶活性的硫磺菊素和紫铆花素的方法

摘要

本发明涉及从漆树木粉中提取具有抑制酪氨酸酶活性的硫磺菊素和紫铆花素的方法，属于天然药物化学与化妆品的开发和应用领域。以漆树木粉为原料、经过提取、萃取、硅胶柱层析及中低压色谱可以快速有效地制备高含量的硫磺菊素和紫铆花素化合物。本发明制备的硫磺菊素和紫铆花素单体具有低浓度抑制酷氨酸酶的活性，对人体无毒害作用，在50μg/mL的浓度时，对酪氨酸酶的抑制率>95%，该制备过程快速简单，是开发潜在的天然酪氨酸酶抑制剂的良好来源，用于美白化妆品、预防和治疗由于人体黑色素过多导致的沉着性疾病，具有很好的商业前景。 1

主权项

1.从漆树木粉中提取具有抑制酪氨酸酶活性的硫磺菊素和紫铆花素的方法，其特征在于由以下步骤组成：

第一步

将漆树木粉，干燥去渣，按质量体积比为1:10~1:30(g:mL)，加入质量分数为50~95%的乙醇水溶液或乙酸乙酯水溶液，减压回流提取2~3次，每次1~3h，过滤，滤液合并，于40~60℃下减压蒸发除去溶剂，得到含水粗提液；

第二步

粗提液按质量比1:3~1:10(g:mL)加入蒸馏水，搅拌溶解，加入石油醚萃取1~5次，分离，在40~60℃下减压蒸发除去溶剂，得到石油醚萃取物；水层继续用乙酸乙酯萃取1~5次，分离，在40~60℃下减压蒸发除去溶剂，干燥得到乙酸乙酯萃取物;

第三步

将乙酸乙酯萃取物与硅胶填料按质量比1:15‑50吸附，柱长50‑150 cm，柱直径4‑20 cm，采用不同比例石油醚与乙酸乙酯进行洗脱，收集抑制酪氨酸酶活性较高的石油醚:乙酸乙酯体积比为6:4‑5:5(v:v)的部位，真空浓缩，回收溶剂，得到富含硫磺菊素和紫铆花素的提取物；

第四步

将富含硫磺菊素和紫铆花素的提取物与中低压色谱填料按质量比1:15‑50吸附，中压柱柱长20‑80 cm，柱直径2‑8 cm，采用不同比例的洗脱剂进行洗脱，柱压为0.5‑10 MPa, 检测波长220‑360 nm，流速3‑50 mL/min，分别收集硫磺菊素和紫铆花素部位，真空浓缩，回收溶剂，得到硫磺菊素和紫铆花素样品，将硫磺菊素和紫铆花素进行HPLC分析，含量为95%以上；

第五步

硫磺菊素和紫铆花素进行抑制酪氨酸酶活性评价，通过紫外色谱检测多巴色素的生成量，确定当硫磺菊素甲醇溶液浓度范围在1~50μg/mL，抑制率为31.5~100%，其IC50值为3.74 μg/mL；当紫铆花素甲醇溶液浓度范围在1~50μg/mL，抑制率为25~98.6%，其IC50值为4.32μ g/mL；通过对抑制酪氨酸酶活性的机理研究，硫磺菊素的抑制类型为竞争型，紫铆花素的抑制类型为非竞争型。

2.根据权利要求1所述从漆树木粉中提取具有抑制酪氨酸酶活性的硫磺菊素和紫铆花素的方法，其特征在于第四步中低压色谱填料为孔径为60 A，20‑60 µm的ODS C18和C8材料中的一种，洗脱剂为甲醇、乙醇和体积比0.5%‑2%(v:v)的醋酸水中的一种或几种的混合溶液。

3.根据权利要求1所述的从漆树木粉中提取具有抑制酪氨酸酶活性的硫磺菊素和紫铆花素的方法，其特征在于HPLC分析条件为：4.6×250mm,5μm 的C18 Gold AQ 反相柱, 流动相为体积比为50:50(v:v)的甲醇:体积比0.5‑1%(v/v)醋酸水溶液，紫外检测器，检测波长为280和360nm, 流速为1mL/min。